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Robo de gorras

Transcripción de ARNm iniciada por la polimerasa viral mediante el método cap snatching

El primer paso de la transcripción para algunos virus de ARN monocatenario negativos es el arrebato de capuchón , en el que se eliminan (arrebatan) los primeros 10 a 20 residuos de un ARN de la célula huésped y se utilizan como capuchón 5' y cebador para iniciar la síntesis del ARNm viral naciente. [1] La ARN polimerasa dependiente del ARN viral (RdRp) puede luego proceder a transcribir el ARNm viral de sentido positivo utilizando el ARN viral de sentido negativo como plantilla. El arrebato de capuchón también explica por qué algunos ARNm virales tienen extensiones terminales 5' de 10-20 nucleótidos que no están codificados en el genoma. Los ejemplos de virus que participan en el arrebato de capuchón incluyen los virus de la influenza ( Orthomyxoviridae ), el virus de Lassa ( Arenaviridae ), el virus hantaan ( Hantaviridae ) y el virus de la fiebre del valle del Rift ( Phenuiviridae ). La mayoría de los virus toman entre 15 y 20 nucleótidos, excepto las familias Arenaviridae y Nairoviridae y el género Thogotovirus ( Orthomyxoviridae ), que utilizan una cadena más corta. [2]

En el virus de la gripe , la captura de la cápsula se produce en el núcleo de la célula. La función de la endonucleasa de captura de la cápsula está contenida en la subunidad PA de la ARN polimerasa . [3]

En Arenaviridae y Bunyavirales , el robo de capuchón se produce en el citoplasma. [4]

Pasos para el robo de gorras

El robo de gorras se produce en tres pasos generales:

1) La proteína viral RdRp o N se une a la estructura cap-1 o cap-2 metilada en 5' del ARNm del huésped.

2) La endonucleasa viral escinde el ARNm varios nucleótidos aguas abajo del casquete.

3) ARN con capuchón utilizado como cebador para iniciar la síntesis de ARNm viral llevada a cabo por RdRp. [2]

Cap snatching y transcripción en la gripe

El robo de capuchón se describe mejor en los virus de la influenza, especialmente la influenza A. En Orthomyxoviridae , la familia viral de la influenza, la RdRp se divide en tres subunidades: PA, PB1 y PB2.

           El PB1 primero se une al extremo 5' del ARN viral (ARNv), activando el PB2 y haciendo que el extremo 3' del ARNv forme una zona de doble cadena con el extremo 5'. El PB2 procede a unirse al ARNm celular en el extremo 5' cubierto con N7-metil guanosina (m 7 G). La subunidad PA posteriormente escinde la secuencia de 10 a 13 nucleótidos de la estructura de la cubierta mediante la actividad de la endonucleasa en el extremo N. [5] La ubicación exacta de la escisión depende tanto de la distancia entre el PB2 y el PA del RdRp (alrededor de 50 angstroms o 10 a 13 nucleótidos) como también de la secuencia del ARNm. Luego, la subunidad PB1, que contiene la actividad de la polimerasa, inicialmente agrega dos nuevos nucleótidos. El cebador arrebatado de la cubierta se mueve a través del túnel de salida del producto en el dominio PB1 para servir como cebador para la transcripción. Los nucleótidos 3'-UCGUUUU del ARNv no están unidos a la polimerasa, sino que están libres para la unión complementaria con el cebador de ARN protegido para conferir estabilidad. Luego, la transcripción comienza con el residuo G o C en el extremo 3' del cebador protegido. [6] Finalmente, la subunidad PB1 completa la elongación de la cadena en la dirección canónica de 5' a 3', liberando el protector, pero manteniendo unido el extremo 5'. La cola poli-A 3' viral se agrega al final de la transcripción por el tartamudeo de la polimerasa a partir del impedimento estérico del bucle del ARNv. [7] El ARNm viral resultante tiene un aspecto idéntico al ARNm del huésped, lo que permite que la maquinaria celular endógena lleve a cabo el procesamiento y la exportación nuclear.

Los ARNm del huésped desprotegidos son objeto de una degradación dirigida, lo que conduce a la regulación negativa del ARNm celular. El RdRp de la gripe también interactúa con el dominio terminal C de la polimerasa II (Pol II) celular, que potencialmente promueve la transcripción viral al cambiar la conformación del RdRp. Además, al reducir la abundancia de Pol II, la gripe puede comenzar a interrumpir la transcripción crítica del huésped. [8]

Durante la replicación no se utiliza el método de apropiación de la tapa. En su lugar, el RdRp realiza un paso de “preparación y realineación” para garantizar que el genoma se copie por completo. En este mecanismo, el RdRp establece un cebador internamente y luego el ARNm se realinea para continuar la replicación. [9]

El dominio de unión a la caperuza PB2 de la influenza tiene un pliegue único, pero utiliza apilamiento aromático para ejecutar la unión a la caperuza m 7 G de manera similar a otras proteínas de unión a la caperuza. PA es un miembro de la familia de nucleasas PD(D/E)XK, que utiliza iones metálicos divalentes para escindir el ácido nucleico. Sin embargo, tiene un residuo de histidina peculiar en el sitio activo que liga el ion Mn2+ utilizado para la escisión. [5]

Terapia farmacológica contra la gripe

En octubre de 2018, la FDA de los Estados Unidos aprobó el baloxavir marboxil para el tratamiento de la gripe aguda sin complicaciones , lo que marca el primer fármaco antiviral nuevo contra la gripe en más de dos décadas. [10] El fármaco utiliza el conocimiento sobre el arrebato de capuchón al dirigirse e inhibir la función de endonucleasa de la subunidad PA, lo que evitará que el virus inicie la transcripción. El baloxavir marboxil (Xofluza) es eficaz contra la gripe A y B. [11]

Arrebato de gorra enArenavirusyVirus Bunya

La familia Arenaviridae y el orden Bunyavirales también son virus de ARN monocatenario, negativos y segmentados. Una endonucleasa dependiente de Mn2 + verificada se encuentra en el extremo N de la proteína L. El dominio TN-terminal se conserva entre varias familias, lo que sugiere una similitud evolutiva. Sin embargo, el dominio de unión a la caperuza no está confirmado para todas las familias de virus, pero se cree que se encuentra en la proteína L o nucleocápside (N o NP).[1] En los bunyavirales, la escisión de la endonucleasa y las preferencias de motivos nucleotídicos varían entre familias, géneros y especies. Esta variación se produce debido a la necesidad de algún apareamiento de bases con el extremo 3' del genoma viral. [7]

La estructura de la nucleoproteína del virus Lassa ( Arenaviridae ) contiene una segunda nucleasa. Los investigadores proponen que está involucrada en la atenuación de la respuesta al interferón, pero también contiene un sitio de unión a dTTP que puede usarse para el arrebato de la caperuza. En este modelo, las proteínas L y N cooperan en el proceso de arrebato de la caperuza. El modelo de dos dominios también se ha probado para los hantavirus, pero la proteína N en el virus de la fiebre del valle del Rift ( Phenuiviridae ) no posee las mismas características. [12]

Arrebato de gorra enHantavirus

El robo de capuchón también se ha investigado en profundidad en la familia Hantaviridae ( Bunyavirales ). Hay evidencia de que la proteína N se une al capuchón 5' y los protege de la degradación por la maquinaria celular. La proteína N se acumula en los cuerpos de procesamiento celular citoplasmáticos (cuerpos P), secuestrando los capuchones 5' protegidos como un grupo de cebadores disponibles para que el RdRp comience la síntesis de ARNm viral. Hay cuatro nucleótidos en el ARNv que están adyacentes al capuchón 5' para la unión. El virus escinde preferentemente el capuchón del ARNm en un residuo G 14 nucleótidos aguas abajo del capuchón. Además, generalmente escinde los capuchones del ARNm sin sentido en lugar del ARNm traducido activamente. La proteína N puede proteger los capuchones del ARNm del huésped sin cuerpos P, pero el RdRp no los utiliza de manera tan eficiente. [13]

El RdRp de Hantaviridae también puede participar en un mecanismo de “preparación y realineación”: el oligonucleótido del huésped prepara la transcripción del ARNm e inicia la transcripción con un residuo G terminal. Después de que se agregan varios nucleótidos, el ARN naciente se realinea moviendo dos nucleótidos hacia atrás en la secuencia terminal repetida (AUCAUCAUC) de modo que la G del huésped sea nuevamente el primer nucleótido, creando una extensión del extremo 5'. [14]


Referencias

  1. ^ Decroly, E; Canard, B (junio de 2017). "Principios bioquímicos e inhibidores para interferir con las vías de protección viral". Current Opinion in Virology . 24 : 87–96. doi :10.1016/j.coviro.2017.04.003. PMC  7185569 . PMID  28527860.
  2. ^ ab Decroly, Etienne; Ferron, François; Lescar, Julien; Canard, Bruno (5 de diciembre de 2011). "Mecanismos convencionales y no convencionales para la protección del ARNm viral". Nature Reviews. Microbiología . 10 (1): 51–65. doi :10.1038/nrmicro2675. ISSN  1740-1534. PMC 7097100 . PMID  22138959. 
  3. ^ Dias, Alexandre; Bouvier, Denis; Crépin, Thibaut; McCarthy, Andrew A.; Hart, Darren J.; Baudin, Florence; Cusack, Stephen; Ruigrok, Rob WH (16 de abril de 2009). "La endonucleasa cap-snatching de la polimerasa del virus de la influenza reside en la subunidad PA". Nature . 458 (7240): 914–918. Bibcode :2009Natur.458..914D. doi :10.1038/nature07745. ISSN  1476-4687. PMID  19194459. S2CID  4421958.
  4. ^ "Cap snatching ~ ViralZone page" (Robo de gorras ~ página de ViralZone). viralzone.expasy.org . Consultado el 5 de diciembre de 2019 .
  5. ^ ab Crépin, Thibaut; Dias, Alexandre; Palencia, Andrés; Swale, Christopher; Cusack, Stephen; Ruigrok, Rob WH (15 de septiembre de 2010). "Análisis mutacional y de unión a metales del dominio endonucleasa de la subunidad PA de la polimerasa del virus de la influenza". Journal of Virology . 84 (18): 9096–9104. doi :10.1128/JVI.00995-10. ISSN  0022-538X. PMC 2937609 . PMID  20592097. 
  6. ^ De Vlugt, Corey; Sikora, Dorota; Pelchat, Martín (16 de noviembre de 2018). "Perspectiva sobre la influenza: un virus que roba la tapa". Virus . 10 (11): 641. doi : 10.3390/v10110641 . ISSN  1999-4915. PMC 6266781 . PMID  30453478. 
  7. ^ ab "Ovidio: Bienvenidos a Ovidio". ovidsp.dc2.ovid.com . Consultado el 5 de diciembre de 2019 .
  8. ^ Walker, Alexander P.; Fodor, Ervin (mayo de 2019). "Interacción entre el virus de la influenza y la maquinaria transcripcional de la ARN polimerasa II del huésped". Tendencias en microbiología . 27 (5): 398–407. doi :10.1016/j.tim.2018.12.013. ISSN  1878-4380. PMC 6467242 . PMID  30642766. 
  9. ^ Oimanos, Judith; Te Velthuis, Aartjan JW (1 de febrero de 2018). "Un mecanismo de preparación y realineación durante la replicación del virus de la influenza A". Revista de Virología . 92 (3). doi :10.1128/JVI.01773-17. ISSN  1098-5514. PMC 5774886 . PMID  29118119. 
  10. ^ Comisionado, Oficina del. "Comunicados de prensa: la FDA aprueba un nuevo fármaco para tratar la influenza". www.fda.gov . Consultado el 25 de octubre de 2018 .
  11. ^ O'Hanlon, Ryan; Shaw, Megan L. (abril de 2019). "Baloxavir marboxil: el nuevo fármaco antigripal en el mercado". Current Opinion in Virology . 35 : 14–18. doi :10.1016/j.coviro.2019.01.006. ISSN  1879-6265. PMID  30852344. S2CID  73726080.
  12. ^ Morin, Benjamín; Coutard, Bruno; Lelke, Michaela; Ferrón, François; Kerber, Romy; Jamal, Saïd; Frangeul, Antoine; Baronti, Cécile; Charrel, Rémi; de Lamballerie, Xavier; Vonrhein, Clemens (16 de septiembre de 2010). "El dominio N-terminal de la proteína L de arenavirus es una ARN endonucleasa esencial en la transcripción del ARNm". Más patógenos . 6 (9): e1001038. doi : 10.1371/journal.ppat.1001038 . ISSN  1553-7374. PMC 2940758 . PMID  20862324. 
  13. ^ Mir, MA; Duran, WA; Hjelle, BL; Ye, C.; Panganiban, AT (9 de diciembre de 2008). "Almacenamiento de tapas de ARNm 5′ celulares en cuerpos P para el arrebato de tapa viral". Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 105 (49): 19294–19299. Bibcode :2008PNAS..10519294M. doi : 10.1073/pnas.0807211105 . ISSN  0027-8424. PMC 2614755 . PMID  19047634. 
  14. ^ Cheng, Erdong; Mir, Mohammad A. (septiembre de 2012). "Firmas del extremo 5' del ARNm del huésped para una eficiente captura de la cápsula del hantavirus". Journal of Virology . 86 (18): 10173–10185. doi :10.1128/JVI.05560-11. ISSN  1098-5514. PMC 3446632 . PMID  22787213.