La sortasa A ( EC 3.4.22.70, SrtA , proteína SrtA , sortasa SrtA ) es una enzima . [1] [2] [3] Esta enzima cataliza una reacción de clasificación de la pared celular , en la que una proteína de superficie con una señal de clasificación que contiene un motivo LPXTG se escinde entre los residuos Thr y Gly.
Esta enzima pertenece a la familia de las peptidasas C60.
La Sortasa A tiene un pliegue en barril β de ocho cadenas con una hendidura hidrofóbica formada por cadenas β7-β8. Esta hendidura está rodeada por bucles β3-β4, β2-β3, β6-β7 y β7-β8. El residuo de cisteína catalítica se encuentra en esta hendidura y acepta la unión posterior de un agente nucleofílico. El bucle β3-β4 contiene un sitio de unión de calcio que une el calcio mediante coordinación con un residuo en el bucle β6-β7. Dicha unión ralentiza el movimiento del bucle β6-β7, lo que permite que el sustrato de la Sortasa se una y aumente su actividad ocho veces. [4]
La sortasa A se ha utilizado ampliamente como herramienta in vitro para modificar postraduccionalmente las proteínas en los extremos N y C con una etiqueta adjunta. Estas etiquetas incluyen biotina, fluoróforos, reticulantes y sondas multifuncionales. [5]
En ambos casos, se diseña una molécula para que contenga un motivo LPXTG en un extremo y otra molécula para que contenga un motivo (Gly)n en el otro extremo. Tras la escisión del motivo LPXTG, la Sortasa forma un intermedio tioéster con la molécula diseñada. Este intermedio se resuelve luego mediante un ataque nucleofílico por parte de la molécula que contiene (Gly)n para formar una fusión entre las dos moléculas con un motivo LPXT(Gly)n intermedio.
Para lograr el etiquetado N-terminal de una proteína, el motivo LPXTG se diseña para que esté en el extremo C-terminal de la etiqueta. La proteína se diseña para que tenga un (Gly)n N-terminal. Para lograr el etiquetado C-terminal de la misma proteína, el motivo LPXTG se diseña para que esté en el extremo C-terminal de la proteína. Una molécula (Gly)n se diseña para que contenga la etiqueta en su extremo C-terminal.
Finalmente, tanto los extremos N como C de las proteínas se pueden marcar utilizando Sortasas de diferente especificidad de sustrato. Por ejemplo, la Sortasa A de Streptococcus pyogenes reconoce y escinde el motivo LPXTA y acepta nucleófilos basados en Ala. Esta SrtA también reconoce y escinde el motivo LPXTG con una eficiencia reducida. Sin embargo, la Sortasa A de Staph. A. no reconoce los sustratos LPXTA y, por lo tanto, es ortogonal a la secuencia LPXTA.
Además, la Sortasa A también se ha utilizado para crear por partes proteínas, dominios proteicos y péptidos. [6]
