La microscopía electrónica in situ es una técnica de investigación en la que se utiliza un microscopio electrónico para observar la respuesta de una muestra a un estímulo en tiempo real. Debido a la naturaleza del haz de electrones de alta energía que se utiliza para obtener imágenes de una muestra en un microscopio electrónico, los microscopistas han observado durante mucho tiempo que las muestras se modifican o dañan rutinariamente por el haz de electrones. A partir de la década de 1960, y utilizando microscopios electrónicos de transmisión (MET), los científicos hicieron intentos deliberados de modificar los materiales mientras la muestra estaba en la cámara de muestras y de capturar imágenes a través del tiempo de los daños inducidos.
También en la década de 1960, los científicos de materiales que utilizaban TEM comenzaron a estudiar la respuesta de muestras metálicas transparentes a los electrones a la irradiación con un haz de electrones. Esto se hizo con el fin de comprender mejor la fatiga del metal durante los vuelos aéreos y espaciales. Los experimentos se realizaron en instrumentos con altos voltajes de aceleración; la resolución de la imagen era baja en comparación con la resolución subnanométrica disponible con los TEM modernos.
Las mejoras en la microscopía electrónica a partir de la década de 1960 se centraron en aumentar la resolución espacial. Esto requirió una mayor estabilidad para toda la plataforma de imágenes, pero en particular para el área alrededor de la platina de la muestra. Los sistemas de captura de imágenes mejorados que utilizan cámaras con dispositivos acoplados a carga y los avances en las platinas de la muestra, junto con la mayor resolución, llevaron a la creación de sistemas dedicados a aplicar estímulos a las muestras en soportes especializados y capturar múltiples fotogramas o videos de las respuestas de las muestras.
Además de las muestras de materiales, la microscopía electrónica in situ se realiza en muestras biológicas y se utiliza para realizar experimentos que involucran respuestas mecánicas, químicas, térmicas y eléctricas. Los primeros experimentos utilizaban principalmente microscopios electrónicos de barrido, porque la imagen se captura en un solo cuadro, mientras que el microscopio electrónico de barrido debe moverse o escanear la muestra mientras se aplican los estímulos, alterando la muestra.
Los primeros problemas que limitaron la microscopía electrónica in situ incluían la vibración mecánica en todas las escalas (desde el propio microscopio hasta la muestra) y la interferencia térmica y eléctrica, en particular en el portamuestras. Todos estos problemas requerían tiempos de captura rápidos. Sin embargo, un tiempo de captura rápido crea una imagen con una baja relación señal-ruido , limita la resolución de la imagen y también limita la cantidad de tiempo disponible para realizar el experimento. [1]
Referencias
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