Los análogos de aminoácidos fotorreactivos son análogos artificiales de aminoácidos naturales que se pueden utilizar para la reticulación de complejos proteicos. [1] Los análogos de aminoácidos fotorreactivos se pueden incorporar a proteínas y péptidos in vivo o in vitro . [2] Los análogos de aminoácidos fotorreactivos de uso común son los análogos de diazirina fotorreactivos a la leucina y la metionina , y la para -benzoilfenilalanina. Tras la exposición a la luz ultravioleta , se activan y se unen covalentemente a las proteínas interactuantes que se encuentran a unos pocos angstroms del análogo de aminoácido fotorreactivo.
La L -fotoleucina y la L -fotometionina son análogos de losaminoácidos L - leucina y L - metionina, que se encuentran en la naturaleza y que se incorporan de forma endógena a la secuencia primaria de las proteínas durante la síntesis mediante la maquinaria de traducción normal. Luego, se activan con luz ultravioleta (UV) para unir de forma covalente las proteínas dentro de los dominios de interacción proteína-proteína en su entorno nativo in vivo . El método permite la determinación y caracterización de interacciones proteicas tanto estables como transitorias en las células sin la adición de reticulantes químicos y solventes asociados que pueden afectar negativamente la biología celular que se estudia en el experimento.
Cuando se utilizan en combinación con medios limitantes que carecen de leucina y metionina, los derivados fotoactivables son tratados como aminoácidos naturales por la maquinaria de síntesis de proteínas celulares . Como resultado, pueden sustituir a la leucina o la metionina en la estructura primaria de las proteínas. Los derivados de fotoleucina y fotometionina contienen anillos de diazirina que se activan cuando se exponen a la luz ultravioleta para convertirse en intermediarios reactivos que forman enlaces covalentes con las cadenas laterales y las estructuras principales de las proteínas cercanas. Las proteínas que interactúan naturalmente dentro de la célula pueden quedar atrapadas instantáneamente mediante la fotoactivación de las proteínas que contienen diazirina en las células cultivadas. Los complejos proteicos reticulados pueden detectarse mediante la disminución de la movilidad en SDS-PAGE seguida de Western blotting , cromatografía de exclusión por tamaño , sedimentación en gradiente de densidad de sacarosa o espectrometría de masas .