La solución de Bouin , o solución de Bouin , es un fijador compuesto utilizado en histología . [1] Fue inventado por el biólogo francés Pol Bouin y está compuesto de ácido pícrico , ácido acético y formaldehído en una solución acuosa. [2] El líquido de Bouin es especialmente útil para la fijación de biopsias del tracto gastrointestinal porque este fijador permite una tinción nuclear mejor y más nítida que la formalina tamponada neutra al 10%. No es un buen fijador cuando se debe preservar la ultraestructura del tejido para la microscopía electrónica . Sin embargo, es un buen fijador cuando se debe preservar la estructura del tejido con una textura suave y delicada. El ácido acético de este fijador lisa los glóbulos rojos y disuelve pequeños depósitos de hierro y calcio en los tejidos. Una variante en la que el ácido acético se sustituye por ácido fórmico puede utilizarse tanto para la fijación del tejido como para la descalcificación. [3] Los efectos de los tres químicos en la solución Bouin se equilibran entre sí. La formalina hace que el citoplasma se vuelva basófilo, pero este efecto se equilibra con el efecto del ácido pícrico. Esto da como resultado una excelente tinción nuclear y citoplásmica con H&E . El efecto endurecedor de los tejidos de la formalina se equilibra con la fijación de los tejidos blandos por parte de los ácidos pícrico y acético. El efecto de hinchazón del tejido del ácido acético se equilibra con el efecto de contracción del tejido del ácido pícrico. [4]
Las secciones hidratadas de tejido fijado con formaldehído generalmente se tratan previamente con solución de Bouin para obtener resultados correctos en las tinciones tricrómicas para colores contrastantes en fibras colágenas y citoplasmáticas (musculares). Los métodos tricrómicos se idearon para tejidos fijados en mezclas ácidas que contienen cloruro de mercurio, que ahora se utilizan sólo en pequeña escala). Sólo se necesita el componente de ácido pícrico de la solución de Bouin para lograr esta corrección de la tinción tricrómica. [5]
Al utilizar la solución Bouin, pueden surgir varios problemas potenciales. Debido a la formalina en la solución, puede haber pigmento de formalina presente al observar secciones de tejido bajo el microscopio. El tejido húmedo debe fijarse en solución de Bouin durante menos de 24 horas. El exceso de ácido pícrico debe eliminarse del tejido mediante varias soluciones de alcohol y agua o la calidad de la tinción puede deteriorarse con el tiempo. El tejido húmedo fijado en solución de Bouin debe almacenarse en una solución de alcohol y agua en lugar de en una solución de Bouin. Dado que la solución de Bouin contiene formaldehído, ácido pícrico y ácido acético, se deben tomar las precauciones de seguridad adecuadas para estas sustancias y seguir las normas. En particular, cabe señalar que el ácido pícrico puede ser explosivo, sensible a la fricción y a los golpes cuando está seco y en contacto con algunos metales puede formar picratos metálicos inestables.
Bajo el nombre de "líquido de Bouin", este fijador también se utiliza mucho para los invertebrados marinos. [6] Se prepara de la siguiente manera: ácido pícrico, solución acuosa saturada – 75 ml; formalina, solución acuosa al 40% – 25 ml; ácido acético glacial – 5 ml. [7]
La solución Gendre es una versión alcohólica de la solución Bouin. Se utiliza una solución alcohólica saturada con ácido pícrico en lugar de una solución acuosa saturada con ácido pícrico al preparar esta solución. Esta solución es útil cuando es necesario conservar el glucógeno y otros carbohidratos en el tejido. Se prepara mezclando una solución saturada de ácido pícrico en etanol al 95% (80 ml) con formalina (37-40 % de formaldehído) (15 ml) y ácido acético glacial (5 ml). [8] El fijador de Gendre contiene más ácido pícrico que el de Bouin, debido a una mayor solubilidad (6,23% p/v) en etanol que en agua (1,23% p/v). [9]
La solución Hollande es una versión de la solución Bouin que contiene acetato de cobre . El acetato de cobre estabiliza las membranas de los glóbulos rojos y los gránulos de eosinófilos y células endocrinas , de modo que hay menos lisis de estos componentes celulares que la que ocurre en la solución Bouin normal. [10] El fijador Hollandes se elabora añadiendo 6,25 g de acetato cúprico, 10 g de ácido pícrico (polvo húmedo), 25 ml de formalina (37-40 % de formaldehído) y 2,5 ml de ácido acético glacial (100 %) a 250 ml de agua. [11]