La microscopía electrónica de luz correlativa ( CLEM ) es la combinación de un microscopio óptico (generalmente un microscopio de fluorescencia ) con un microscopio electrónico . En un sistema CLEM integrado, se obtienen imágenes de la muestra utilizando un haz de electrones y una trayectoria de luz óptica simultáneamente. Tradicionalmente, las muestras se obtendrían mediante dos modalidades de microscopía separadas, potencialmente en diferentes instalaciones y utilizando diferentes métodos de preparación de muestras. Por tanto, el CLEM integrado se considera beneficioso porque la metodología es más rápida y sencilla y reduce la posibilidad de cambios en la muestra durante el proceso de recopilación de datos. De este modo, la superposición de ambas imágenes se realiza automáticamente mediante la integración de dos microscopios. [1]
Esta técnica se utiliza para obtener información a diferentes escalas de longitud: el microscopio electrónico proporciona información de alta resolución hasta la nanoescala, mientras que el microscopio de fluorescencia resalta las regiones de interés. CLEM se utiliza para diversas disciplinas de las ciencias biológicas , incluidas la neurociencia , la investigación de tejidos y la investigación de proteínas .
En preparación para la obtención de imágenes con un microscopio de fluorescencia, se pueden utilizar diferentes métodos, como fluoróforos o tintes, inmunomarcaje y proteínas fluorescentes codificadas genéticamente. Se pueden utilizar diferentes etiquetas fluorescentes para resaltar múltiples regiones de interés en la muestra. [2] Recientemente Kumar et al. [3] combinaron mediciones de tensión molecular basadas en FRET [4] con microscopía crioelectrónica para estudiar cómo la fuerza sobre la talina (una proteína de adhesión focal que une directamente las integrinas con la actina) se relaciona con la organización de la actina. Las regiones de alta tensión de talino tienen actina filamentosa lineal y altamente alineada, mientras que las regiones de baja tensión tienen una estructura de actina menos alineada. [3]
El microscopio electrónico se utiliza para obtener información estructural a escala nanométrica. A diferencia de un microscopio óptico, un microscopio electrónico es capaz de superar el límite de difracción de la luz. Esto se debe a que la longitud de onda de los electrones acelerados es mucho más corta que la longitud de onda de la luz visible. [5]