Homogeneizador Dounce

Los homogeneizadores Dounce, dispositivos utilizados para la lisis mecánica de tejidos o células, fueron inventados por Alexander Dounce y recibieron su nombre en su honor.

El homogeneizador Dounce , o "Douncer", fue inventado por Alexander Dounce ^{[1] [2] y recibió su nombre en honor a él. Es un tubo de vidrio cilíndrico, cerrado en un extremo, con dos manos de mortero de vidrio de diámetros exteriores cuidadosamente especificados, destinado a la} homogeneización suave de células eucariotas (por ejemplo, células de mamíferos). Los homogeneizadores Dounce todavía se utilizan comúnmente hoy en día para aislar orgánulos celulares.

Los dos morteros homogeneizadores Dounce (conocidos como morteros "sueltos" o "A" y morteros "apretados" o "B") tienen un diámetro exterior cuidadosamente especificado, en relación con el diámetro interior del cilindro. El mortero "A" (suelto) tiene una distancia a la pared del cilindro de (~0,0025 - 0,0055 pulgadas), mientras que el mortero "B" (apretado) tiene una distancia a la pared del cilindro de (~0,0005 - 0,0025 pulgadas). ^[3] Esto permite que los tejidos y las células se lisen mediante tensión de corte con un grado mínimo (si es que hay alguno) de calentamiento, dejando así los orgánulos extraídos o los complejos enzimáticos sensibles al calor prácticamente intactos.

Hipocampo de ratón homogeneizado en el fondo de un tubo homogeneizador Dounce.

Por lo general, se corta o se rompe un tejido blando (por ejemplo, el hígado de un mamífero) en trozos más pequeños y se coloca en el cilindro de vidrio, junto con un volumen adecuado de un tampón de lisis apropiado . La homogeneización se realiza mediante un número definido de "pasadas" de los morteros, primero con el mortero suelto y luego con el mortero apretado, hacia arriba y hacia abajo del cilindro. ^[4] Lo típico son cinco a diez pasadas. Los homogeneizadores Dounce se fabrican normalmente a partir de vidrio de borosilicato, pero siguen siendo frágiles y deben usarse con cuidado. Especialmente los tejidos duros o resistentes deben homogeneizarse previamente antes de su uso en un homogeneizador Dounce.

Las células eucariotas con paredes celulares resistentes, como Saccharomyces cerevisiae , no se pueden lisar directamente con un homogeneizador dounce, a menos que primero se descomponga la pared celular (por ejemplo, con liticasa o zimoliasa en el caso de S. cerevisiae ).

Referencias

1. Dounce, AL ; Monty, KJ; Pate, S. (1954). "Formación en gel de núcleos celulares aislados mediante un procedimiento mejorado". FASEB J. 13 : 201. ISSN  0014-9446.
2. Dounce, AL (1955). "Un método para aislar mitocondrias y núcleos intactos del mismo homogeneizado y la influencia de la destrucción mitocondrial en las propiedades de los núcleos celulares". Revista de biología celular . 1 (2): 139–153. doi :10.1083/jcb.1.2.139. ISSN  0021-9525. PMC 2223770 . PMID  14381436. 
3. "Copia archivada" (PDF) . Archivado desde el original (PDF) el 8 de enero de 2019. Consultado el 8 de enero de 2019 .{{cite web}}: CS1 maint: copia archivada como título ( enlace )
4. Dennison, C. (2013). Una guía para el aislamiento de proteínas. Enfoque en la biología estructural. Springer Netherlands. p. 42. ISBN 978-94-017-0269-0. Recuperado el 8 de enero de 2019 .