Gen para comprobar si la secuencia de ácido nucleico se insertó con éxito en el ADN de un organismo
En biología , un gen marcador puede tener varios significados. En biología nuclear y biología molecular, un gen marcador es un gen que se utiliza para determinar si una secuencia de ácido nucleico se ha insertado con éxito en el ADN de un organismo . En particular, hay dos subtipos de estos genes marcadores: un marcador seleccionable y un marcador para cribado . En metagenómica y filogenética , un gen marcador es un grupo de genes ortólogos que se puede utilizar para delinear entre linajes taxonómicos. [1]
Marcador seleccionable
Un marcador seleccionable protege al organismo de un agente selectivo que normalmente lo mataría o impediría su crecimiento. En una reacción de transformación, dependiendo de la eficiencia de la transformación , solo una de varios millones a miles de millones de células puede absorber ADN. En lugar de verificar cada célula, los científicos utilizan un agente selectivo para matar todas las células que no contienen el ADN extraño, dejando solo las deseadas.
Los antibióticos son los agentes selectivos más comunes. En las bacterias, se utilizan casi exclusivamente antibióticos. En las plantas, también se suelen utilizar antibióticos que matan el cloroplasto , aunque la tolerancia a las sales y a las hormonas inhibidoras del crecimiento se está volviendo más popular. En los mamíferos, la resistencia a los antibióticos que matarían las mitocondrias se utiliza como marcador de selección.
Marcador que se puede proyectar
Un marcador detectable hará que las células que contienen el gen se vean diferentes. Hay tres tipos de detección que se utilizan comúnmente:
- La proteína fluorescente verde hace que las células brillen de color verde bajo la luz ultravioleta. Se necesita un microscopio especializado para ver células individuales. También existen versiones amarillas y rojas, de modo que los científicos pueden observar varios genes a la vez. Se utiliza comúnmente para medir la expresión genética . [2]
- El ensayo GUS (que utiliza β-glucuronidasa ) es un método excelente para detectar una sola célula tiñéndola de azul sin utilizar ningún equipo complicado. El inconveniente es que las células mueren en el proceso. Es particularmente común en la ciencia vegetal.
- La pantalla azul-blanca se utiliza tanto en bacterias como en células eucariotas. El gen bacteriano lacZ codifica una enzima beta-galactosidasa . Cuando el medio contiene ciertos galactósidos (p. ej. , X-gal ), las células que expresan la enzima convierten la X-gal en un producto azul y se puede ver a simple vista. Por lo tanto, la estrategia es integrar el inserto de ADN dentro del gen lacZ y seleccionar las colonias de color blanco , dado que habrán integrado correctamente el inserto. Las colonias azules, por otro lado, podrán convertir la X-gal y dar lugar al precipitado azul porque el inserto de ADN no se integró en absoluto o no se integró en la ubicación correcta dentro del plásmido .
Véase también
Referencias
- ^ Ren R, Sun Y, Zhao Y, Geiser D, Ma H, Zhou X (2016). "Resolución filogenética de relaciones profundas entre eucariotas y hongos utilizando genes nucleares de bajo número de copias altamente conservados". Genome Biol Evol . 8 (9): 2683–701. doi :10.1093/gbe/evw196. PMC 5631032 . PMID 27604879.
- ^ Chalfie, Martin, et al. "Proteína fluorescente verde como marcador de expresión genética". Science 263.5148 (1994): 802-805.