La extracción con fenol-cloroformo es una técnica de extracción líquido-líquido en biología molecular que se utiliza para separar los ácidos nucleicos de las proteínas y los lípidos . [1]
Las muestras acuosas, las células lisadas o el tejido homogeneizado se mezclan con volúmenes iguales de una mezcla de fenol : cloroformo . A continuación, esta mezcla se centrifuga. Debido a que la mezcla de fenol:cloroformo es inmiscible con agua, la centrifugadora hará que se formen dos fases distintas: una fase acuosa superior y una fase orgánica inferior. La fase acuosa sube a la parte superior porque es menos densa que la fase orgánica que contiene el fenol:cloroformo. Esta diferencia de densidad es la razón por la que el fenol, que solo tiene una densidad ligeramente superior a la del agua, debe mezclarse con cloroformo para formar una mezcla con una densidad mucho mayor que la del agua.
Los lípidos hidrófobos se dividirán en la fase orgánica inferior y las proteínas permanecerán en la interfase entre las dos fases, mientras que los ácidos nucleicos (así como otros contaminantes como sales, azúcares, etc.) permanecerán en la fase acuosa superior. La fase acuosa superior se puede pipetear. Se debe tener cuidado de evitar pipetear cualquier parte de la fase orgánica o material en la interfaz . Este procedimiento a menudo se realiza varias veces para aumentar la pureza del ADN. [2] Este procedimiento produce ADN bicatenario grande que se puede utilizar en PCR o RFLP .
Si la mezcla es ácida, el ADN precipitará en la fase orgánica mientras que el ARN permanecerá en la fase acuosa. Esto se debe a que el ADN se neutraliza más fácilmente que el ARN.
Esta técnica tiene algunas desventajas en el uso forense. Requiere mucho tiempo y utiliza reactivos peligrosos. Además, debido a que es un proceso de dos pasos que implica la transferencia de reactivos entre tubos, existe un mayor riesgo de contaminación . [3]