En bioquímica y biología molecular, un análisis de pulso-persecución es un método para examinar un proceso celular que ocurre a lo largo del tiempo mediante la exposición sucesiva de las células a un compuesto marcado (pulso) y luego al mismo compuesto en una forma no marcada (persecución). [1]
En primer lugar, se expone una célula seleccionada o un grupo de células a un compuesto marcado (el pulso) que se va a incorporar a una molécula o sistema que se está estudiando (véase también marcaje por pulsos ). A continuación, el compuesto pasa por las vías metabólicas y se utiliza en la síntesis del producto estudiado. Por ejemplo, se puede suministrar una forma de leucina marcada radiactivamente ( 3 H-leucina) a un grupo de células beta pancreáticas , que luego utilizan este aminoácido en la síntesis de insulina .
Poco después de la introducción del compuesto marcado (normalmente unos 5 minutos, pero el tiempo real necesario depende del objeto estudiado), se introduce en el medio ambiente un exceso de la misma sustancia, pero no marcada (el chase). Siguiendo el ejemplo anterior, la producción de insulina continuaría, pero ya no contendría la leucina radiactiva introducida en la fase de pulso y no sería visible mediante métodos de detección radiactiva. Sin embargo, el movimiento de la insulina marcada producida durante el período de pulso aún podría rastrearse dentro de la célula. [2]
Este método es útil para determinar la actividad de ciertas células durante un período prolongado de tiempo. El método se ha utilizado para estudiar la proteína quinasa C , la ubiquitina y muchas otras proteínas. El método también se utilizó para demostrar la existencia y función de los fragmentos de Okazaki . George Palade utilizó la técnica de pulso-persecución de aminoácidos radiactivos para dilucidar la vía secretora . [3] [4]
Figuras y tablas: muestran el análisis de pulso-persecución
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