El ensayo de proteínas de Lowry es un ensayo bioquímico para determinar el nivel total de proteínas en una solución . La concentración total de proteínas se muestra mediante un cambio de color de la solución de muestra en proporción a la concentración de proteínas, que luego se puede medir utilizando técnicas colorimétricas . Recibe su nombre del bioquímico Oliver H. Lowry , quien desarrolló el reactivo en la década de 1940. Su artículo de 1951 que describe la técnica es el artículo más citado de la literatura científica, citado más de 300.000 veces. [1] [2] [3]
El método combina las reacciones de los iones de cobre con los enlaces peptídicos en condiciones alcalinas ( prueba de Biuret ) con la oxidación de residuos proteicos aromáticos . El método de Lowry se basa en la reacción del Cu + , producido por la oxidación de los enlaces peptídicos, con el reactivo de Folin-Ciocalteu (una mezcla de ácido fosfotúngstico y ácido fosfomolíbdico en la reacción de Folin-Ciocalteu). El mecanismo de reacción no se conoce bien, pero implica la reducción del reactivo de Folin-Ciocalteu y la oxidación de residuos aromáticos (principalmente triptófano , también tirosina ).
Se debe tener mucho cuidado al manipular el reactivo de Folin, que solo es activo en condiciones ácidas. Si bien esto es cierto, la reacción de reducción, como se mencionó anteriormente, solo ocurrirá en un pH básico de 10. Por lo tanto, la reducción debe ocurrir antes de que el reactivo se descomponga. Mezclar la solución de proteína mientras se agrega simultáneamente el reactivo de Folin garantizará que la reacción ocurra de la manera deseada. [4]
Los experimentos han demostrado que la cisteína también es reactiva al reactivo. Por lo tanto, los residuos de cisteína en la proteína probablemente también contribuyen a la absorbancia observada en el ensayo de Lowry. [5] El resultado de esta reacción es una molécula azul intensa conocida como azul de heteropolimolibdeno. [6] La concentración del reactivo de Folin reducido (azul de heteropolimolibdeno) se mide por absorbancia a 660 nm. [7] Como resultado, la concentración total de proteína en la muestra se puede deducir a partir de la concentración de residuos de triptófano y tirosina que reducen el reactivo de Folin-Ciocalteu.
El método fue propuesto por primera vez por Lowry en 1951. El ensayo de ácido bicinconínico y el ensayo de Hartree-Lowry son modificaciones posteriores del procedimiento original de Lowry.