Análisis de dispersión inducida por flujo.

El principio FIDA: se introduce una zona indicadora estrecha en un capilar bajo flujo hidrodinámico. Cuando el indicador no está limitado, se observa un pico estrecho en el detector. Sin embargo, cuando el indicador está unido al analito objetivo, el tamaño aparente aumenta y se observa un pico más amplio. Este cambio de tamaño se puede utilizar para determinar la concentración y la interacción del analito ^[1] - Publicado por la Royal Society of Chemistry.

El análisis de dispersión inducida por flujo ( FIDA ) es una tecnología sin inmovilización que se utiliza para la caracterización y cuantificación de la interacción biomolecular y la concentración de proteínas en condiciones nativas. ^{[1] [2] [3]} En el ensayo FIDA, se mide el tamaño de un ligando (indicador) con afinidad por el analito objetivo. Cuando el indicador interactúa con el analito, el tamaño aparente aumenta y este cambio de tamaño se puede utilizar para determinar la concentración y la interacción del analito. ^{[1] [2] [4]} Además, se obtiene el radio hidrodinámico del complejo analito-indicador. Un ensayo FIDA normalmente se completa en minutos y solo requiere un consumo de muestra modesto de unos pocos μL. ^[1]

Aplicaciones

• Cuantificación de analitos (por ejemplo, proteínas , péptidos , ADN , nanopartículas ^[5] ) en soluciones complejas (por ejemplo, plasma y caldo de fermentación ^{[6] [7]} )
• Determinación de
  • constantes de afinidad
  • cinética de unión
  • tamaño molecular ( radio hidrodinámico )
  • estado oligomérico ^[8]
  • coeficiente de difusión

Principio

El principio FIDA se basa en medir el cambio en el tamaño aparente ( difusividad ) de un indicador selectivo que interactúa con la molécula del analito. ^{[1] [2] [4]} El tamaño aparente del indicador se mide mediante análisis de dispersión de Taylor en un capilar bajo flujo hidrodinámico. ^[9]

Referencias

1. Poulsen, Nicklas N.; Andersen, Nina Z.; Østergaard, Jesper; Zhuang, Guisheng; Petersen, Nickolaj J.; Jensen, Henrik (15 de junio de 2015). "El análisis de dispersión inducida por flujo cuantifica rápidamente proteínas en muestras de plasma humano". El Analista . 140 (13): 4365–4369. Código bibliográfico : 2015Ana...140.4365P. doi : 10.1039/c5an00697j . ISSN  1364-5528. PMID  26031223.
2. Morten E, Pedersen; Østergaard, Jesper; Jensen, Henrik (2019). "Análisis de dispersión inducida por flujo (FIDA) para cuantificación y caracterización de proteínas". En Phillips, Terry M. (ed.). Aplicaciones clínicas de la electroforesis capilar: métodos y protocolos . Métodos en biología molecular. vol. 1972. Nueva York, Nueva York: Springer Nueva York. págs. 109-123. doi :10.1007/978-1-4939-9213-3. ISBN 9781493992126. S2CID  23665803.
3. Pedersen, Morten E.; Gad, Sara I.; Østergaard, Jesper; Jensen, Henrik (5 de abril de 2019). "Caracterización de proteínas en 3D: tamaño, plegamiento y evaluación funcional en un enfoque unificado". Química analítica . 91 (8): 4975–4979. doi : 10.1021/acs.analchem.9b00537. ISSN  0003-2700. PMID  30916933. S2CID  85544070.
4. Jensen, Henrik; Østergaard, Jesper (31 de marzo de 2010). "El análisis de dispersión inducida por flujo cuantifica interacciones no covalentes en muestras de nanolitros". Revista de la Sociedad Química Estadounidense . 132 (12): 4070–4071. doi :10.1021/ja100484d. ISSN  0002-7863. PMID  20201527.
5. Cholak, Ersoy; Bugge, Katrine; Khondker, Adree; Medidor, Kimmie; Pedraz-Cuesta, Elena; Pedersen, Morten Enghave; Bucciarelli, Saskia; Vestergaard, Bente; Pedersen, Stine F.; Rheinstädter, Maikel C.; Langkilde, Annette Eva (2020). "La avidez dentro del anclaje N-terminal impulsa la interacción e inserción de la membrana de α-sinucleína". La Revista FASEB . 34 (6): 7462–7482. doi : 10.1096/fj.202000107R . ISSN  1530-6860. PMID  32277854. S2CID  215742011.
6. Poulsen, Nicklas N.; Pedersen, Morten E.; Østergaard, Jesper; Petersen, Nickolaj J.; Nielsen, Christoffer T.; Heegaard, Niels HH; Jensen, Henrik (20 de septiembre de 2016). "Análisis de dispersión inducida por flujo para sondear la heterogeneidad de unión de anticuerpos anti-ADNbc en pacientes con lupus eritematoso sistémico: hacia un nuevo enfoque para el diagnóstico y la estratificación de pacientes". Química analítica . 88 (18): 9056–9061. doi : 10.1021/acs.analchem.6b01741. ISSN  0003-2700. PMID  27571264.
7. Pedersen, Morten E.; Østergaard, Jesper; Jensen, Henrik (28 de abril de 2020). "Determinación del título de IgG en solución en caldo de fermentación mediante aficuerpos y análisis de dispersión inducida por flujo". ACS Omega . 5 (18): 10519–10524. doi : 10.1021/acsomega.0c00791 . ISSN  2470-1343. PMC 7227040 . PMID  32426609. 
8. Pedersen, Morten E.; Haegebaert, Ragna MS; Østergaard, Jesper; Jensen, Henrik (26 de febrero de 2021). "Caracterización basada en el tamaño de las interacciones de adalimumab y TNF-α mediante análisis de dispersión inducida por flujo: evaluación de múltiples especies unidas estabilizadas por avidez". Informes científicos . 11 (1): 4754. Código bibliográfico : 2021NatSR..11.4754P. doi : 10.1038/s41598-021-84113-z . ISSN  2045-2322. PMC 7910425 . PMID  33637878. 
9. Taylor, señor Geoffrey; S, Francia (25 de agosto de 1953). "Dispersión de materia soluble en disolvente que fluye lentamente por un tubo". Proc. R. Soc. Londres. A . 219 (1137): 186–203. Código Bib : 1953RSPSA.219..186T. doi :10.1098/rspa.1953.0139. ISSN  0080-4630. S2CID  97372019.