La dietilaminoetilcelulosa ( DEAE-C ) es una resina cargada positivamente utilizada en cromatografía de intercambio iónico , un tipo de cromatografía en columna , para la separación y purificación de proteínas y ácidos nucleicos. Las perlas de matriz de gel se derivan con dietilaminoetanol (DEAE) y bloquean proteínas o ácidos nucleicos cargados negativamente en la matriz. Las proteínas se liberan de la resina aumentando la concentración de sal del disolvente o cambiando el pH de la solución para cambiar la carga de la proteína.
DEAE-C se sintetiza mediante una reacción catalizada por álcalis de celulosa (obtenida de tela de algodón ) con 2-clorotrietilamina, como se ilustra a continuación: [1]
DEAE-C está comúnmente disponible comercialmente como DE52 y DE53. [2] Estas resinas se preparan previamente hinchadas [3] aunque los intercambiadores de celulosa se hinchan en un entorno básico fuerte para aumentar el acceso a los sitios de unión. [4]
DE52 tiene un pKa de 11,5. [ cita necesaria ] El rango de amortiguación para la dietanolamina es 8,4-8,8, aunque el rango para DEAE-C varía según el fabricante. [5]
DEAE- Dextran (DEAE-D) es un derivado de dextrano cargado positivamente que se puede utilizar para la producción de vacunas , terapia génica , estabilización de proteínas, prevención de dislipidemia , agentes floculantes y muchas otras aplicaciones. [6] DEAE-D también se utiliza para transfectar células animales con ADN extraño. Se agrega a una solución que contiene ADN destinada a la transfección. Se une e interactúa con moléculas de ADN cargadas negativamente y, mediante un mecanismo desconocido, provoca la absorción de ácidos nucleicos por la célula. Este procedimiento es muy adecuado para la transfección transitoria utilizada para diversos estudios de biología molecular . [7]
DEAE-Sepharose , DEAE-650 y DEAE- Sephadex se utilizan comúnmente en cromatografía.
DEAE-C es un intercambiador de aniones débil. Este intercambio se utiliza para separar proteínas que tienen cargas ligeramente diferentes. Como todos los intercambiadores aniónicos, la resina lleva una carga positiva que interactúa favorablemente con las cargas negativas. La carga positiva de la celulosa DEAE se debe a un grupo amino protonado. Para garantizar que la resina esté protonada y cargada positivamente, la cromatografía debe realizarse al menos 2 unidades de pH por debajo del pKa del grupo amina, 10. La fuerza del enlace entre la resina y la proteína depende en gran medida del rango de pH en el columna y el pI de la proteína de interés. La resina es un intercambiador débil porque solo está parcialmente ionizada en la mayoría de los valores de pH, y una separación eficaz con cromatografía DEAE-C requiere un rango de pH estrecho y específico. [8]
La celulosa, el dextrano, la agarosa y otros complejos insolubles no se ven afectados porque componen matrices inertes, de ahí que a menudo se deriven con intercambiadores de cationes y aniones fuertes y débiles en cromatografía. "Las perlas DEAE-C tienen cadenas de dietilaminoetilo unidas covalentemente a átomos de oxígeno en las subunidades de D-glucosa de la celulosa ".