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Conversión inducida por temblores en tiempo real

La conversión inducida por temblores en tiempo real ( RT-QuIC ) es un ensayo altamente sensible para la detección de priones . [1] Es casi 100% específico para el diagnóstico de la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob . [2]

Técnica

El término "temblor" en el nombre de la técnica se refiere al hecho de que las muestras en el ensayo RT-QuIC están literalmente sujetas a sacudidas. Esta acción rompe los agregados de proteína priónica (PrP) que luego se incuban, lo que amplifica la cantidad de PrP mal plegada a niveles detectables. [3] [4]

Se trata de un "ensayo temprano, rápido y específico para las enfermedades priónicas". Puede tomar muestras de múltiples tipos, como líquido cefalorraquídeo (LCR), cerebro , ganglios linfáticos , sangre , músculo y piel , por lo que es aplicable a la tembladera en ovejas, la enfermedad crónica debilitante (ECD) en cérvidos, la encefalopatía espongiforme bovina (EEB) en vacas y la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob esporádica en humanos, entre otras. [5]

El ensayo RT-QuIC utiliza en exceso priones normalmente plegados producidos de forma recombinante, a menudo una proteína de hámster sirio truncada, aminoácidos 90-231. Se añaden muestras sospechosas de contener priones mal plegados, lo que provoca un mal plegamiento y agregación de priones normalmente plegados. Estos agregados de proteínas se pueden detectar mediante la detección de fluorescencia de espectro visible con tioflavina T. [6] [7] [8] Los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades incluyen un resultado positivo de RT-QuIC en sus criterios de diagnóstico para el diagnóstico probable de ECJ esporádica. [9]

Los ensayos RT-QuIC también se pueden utilizar para detectar scrapie, BSE y CWD. Varios procedimientos pueden mejorar la sensibilidad y la especificidad. La extracción de metal con óxido de hierro (IOME) utiliza la afinidad natural del metal de la proteína priónica; una muestra se incuba con perlas magnéticas, que se unen a la proteína priónica. La fracción de perlas rica en priones se recolecta y se analiza posteriormente. [10]

Los tejidos que se analizan habitualmente son los homogeneizados cerebrales y los tejidos linfáticos; sin embargo, también se han detectado priones en muestras de piel y sangre. [11] [12] [13] Puede resultar difícil analizar ciertos tejidos para detectar priones. Por ejemplo, las muestras de sangre tienden a tener niveles bajos de priones intracelulares circulantes y tienen inhibidores del ensayo. [14]

Véase también

Referencias

  1. ^ Zerr, Inga; Cramm, Maria; da Silva Correia, Susana Margarida; Zafar, Saima; Villar-Piqué, Anna; Llorens, Franc; Schmitz, Matthias (19 de noviembre de 2020). "Optimización del ensayo de conversión inducida por temblores en tiempo real para el diagnóstico de enfermedades priónicas". Frontiers in Bioengineering and Biotechnology . 8 : 586890. doi : 10.3389/fbioe.2020.586890 . ISSN  2296-4185. PMC  7710546 . PMID  33330419.
  2. ^ Zerr, Inga (7 de abril de 2022). "Diagnóstico de laboratorio de la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob". New England Journal of Medicine . 386 (14): 1345–1350. doi :10.1056/NEJMra2119323.
  3. ^ Lewczuk, Piotr; Riederer, Peter; O'Bryant, Sid E.; Verbeek, Marcel M.; Dubois, Bruno; Visser, Pieter Jelle; Jellinger, Kurt A.; Engelborghs, Sebastiaan; Ramírez, Alfredo; Parnetti, Lucila; Jack, Clifford R.; Teunissen, Charlotte E.; Hampel, Harald; Lleó, Alberto; Jessen, Frank; Glodzik, Lidia; de León, Mony J.; Fagan, Anne M.; Molinuevo, José Luis; Jansen, Willemijn J.; Winblad, Bengt; Shaw, Leslie M.; Andreasson, Ulf; Otto, Marcos; Mollenhauer, británico; Wiltfang, Jens; Turner, Martín R.; Zerr, Inga; Händels, Ron; Thompson, Alejandro G.; Johansson, Gunilla; Ermann, Natalia; Trojanowski, John Q.; Karaca, Ilker; Wagner, Holger; Oeckl, Patricio; van Waalwijk van Doorn, Linda; Bjerke, María; Kapogiannis, Dimitrios; Kuiperij, H. Bea; Farotti, Lucía; Li, Yi; Gordon, Brian A.; Epelbaum, Stéphane; Vos, Stephanie JB; Klijn, Catharina JM; Van Nostrand, William E.; Minguillón, Carolina; Schmitz, Matías; Gallo, Carla; López Mato, Andrea; Thibaut, Florencia; Lista, Simone; Alcolea, Daniel; Zetterberg, Henrik; Blennow, Kaj; Kornhuber, Johannes (27 de octubre de 2017). "Biomarcadores sanguíneos y del líquido cefalorraquídeo para las demencias neurodegenerativas: una actualización del consenso del grupo de trabajo sobre marcadores biológicos en psiquiatría de la Federación Mundial de Sociedades de Psiquiatría Biológica". The World Journal of Biological Psychiatry . 19 (4): 244–328 . doi : 10.1080/15622975.2017.1375556 . PMC 5916324 . PMID  29076399. 
  4. ^ Cramm, María; Schmitz, Matías; Karch, André; Mitrova, Eva; Kuhn, Franziska; Schroeder, Bjoern; Raeber, Alex; Vargés, Daniela; Kim, Yong-Sun; Satoh, Katsuya; Collins, Steven; Zerr, Inga (1 de abril de 2015). "La estabilidad y la reproducibilidad subrayan la utilidad de RT-QuIC para el diagnóstico de la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob". Neurobiología Molecular . 53 (3): 1896-1904. doi : 10.1007/s12035-015-9133-2 . PMC 4789202 . PMID  25823511. 
  5. ^ Atarashi, R.; Sano, K.; Satoh, K.; Nishida, N. (2011). "Conversión inducida por temblores en tiempo real: un ensayo altamente sensible para la detección de priones". Prion . 5 (3): 150–3. doi :10.4161/pri.5.3.16893. PMC 3226039 . PMID  21778820. 
  6. ^ Haley NJ, Hoover EA (2015). "Enfermedad crónica debilitante de los cérvidos: conocimiento actual y perspectivas futuras". Revisión anual de biociencias animales . 3 : 305–25. doi :10.1146/annurev-animal-022114-111001. PMID  25387112.
  7. ^ Atarashi R, Satoh K, Sano K, Fuse T, Yamaguchi N, Ishibashi D, Matsubara T, Nakagaki T, Yamanaka H, ​​Shirabe S, Yamada M, Mizusawa H, Kitamoto T, Klug G, McGlade A, Collins SJ, Nishida norte (febrero de 2011). "Detección ultrasensible de priones humanos en líquido cefalorraquídeo mediante conversión inducida por terremotos en tiempo real" (PDF) . Medicina de la Naturaleza . 17 (2): 175–78. doi :10.1038/nm.2294. hdl : 10069/25642 . PMID  21278748. S2CID  11381303.
  8. ^ Orrú CD, Bongianni M, Tonoli G, Ferrari S, Hughson AG, Groveman BR, Fiorini M, Pocchiari M, Monaco S, Caughey B, Zanusso G (agosto de 2014). "Una prueba para la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob mediante cepillado nasal". La Revista de Medicina de Nueva Inglaterra . 371 (6): 519–29. doi :10.1056/NEJMoa1315200. PMC 4186748 . PMID  25099576. 
  9. ^ "Criterios de diagnóstico de los CDC para la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (ECJ), 2018". Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades. 17 de septiembre de 2018. Consultado el 22 de noviembre de 2018. Adaptado de: a) Vigilancia mundial, diagnóstico y terapia de las encefalopatías espongiformes transmisibles humanas: Informe de una consulta de la OMS, febrero de 1998, Ginebra, Suiza; b) Zerr et al. 2009 c) Unidad Nacional de Investigación y Vigilancia de la ECJ. Protocolo: Vigilancia de la ECJ en el Reino Unido. Artículo c consultado el 15 de agosto de 2018.



    Zerr I, Kallenberg K, Summers DM, Romero C, Taratuto A, Heinemann U, Breithaupt M, Varges D, Meissner B, Ladogana A, Schuur M, Haik S, Collins SJ, Jansen GH, Stokin GB, Pimentel J, Hewer E , Collie D, Smith P, Roberts H, Brandel JP, van Duijn C, Pocchiari M, Begue C, Cras P, Will RG, Sanchez-Juan P (octubre de 2009). "Criterios de diagnóstico clínico actualizados para la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob esporádica". Cerebro . 132 (Parte 10): 2659–68. doi : 10.1093/cerebro/awp191. PMC  2759336 . PMID  19773352.
  10. ^ Denkers ND, Henderson DM, Mathiason CK, Hoover EA (agosto de 2016). "Detección mejorada de priones en muestras biológicas mediante extracción de partículas magnéticas y conversión inducida por temblores en tiempo real". J Gen Virol . 97 (8): 2023–2029. doi :10.1099/jgv.0.000515. PMC 5903251 . PMID  27233771. 
  11. ^ Mammana A, Baiardi S, Rossi M, Franceschini A, Donadio V, Capellari S, Caughey B, Parchi P (abril de 2020). "Detección de priones en biopsias de piel por punción de pacientes con enfermedad de Creutzfeldt-Jakob". Ann Clin Transl Neurol . 7 (4): 559–564. doi :10.1002/acn3.51000. PMC 7187701 . PMID  32141717. 
  12. ^ Concha-Marambio L, Pritzkow S, Moda F, Tagliavini F, Ironside JW, Schulz PE, Soto C (diciembre de 2016). "Detección de priones en sangre de pacientes con enfermedad de Creutzfeldt-Jakob variante". Sci Transl Med . 8 (370): 370ra183. doi :10.1126/scitranslmed.aaf6188. PMC 5538786 . PMID  28003548. 
  13. ^ Orrú CD, Yuan J, Appleby BS, Li B, Li Y, Winner D, Wang Z, Zhan YA, Rodgers M, Rarick J, Wyza RE, Joshi T, Wang GX, Cohen ML, Zhang S, Groveman BR, Petersen RB, Ironside JW, Quiñones-Mateu ME, Safar JG, Kong Q, Caughey B, Zou WQ (noviembre de 2017). "Actividad de siembra de priones e infectividad en muestras de piel de pacientes con enfermedad de Creutzfeldt-Jakob esporádica". Sci Transl Med . 9 (417). doi :10.1126/scitranslmed.aam7785. PMC 5744860 . PMID  29167394. 
  14. ^ Orrú CD, Wilham JM, Raymond LD, Kuhn F, Schroeder B, Raeber AJ, Caughey B (2011). "Análisis de sangre de enfermedades priónicas mediante inmunoprecipitación y mejora de la conversión inducida por temblores". mBio . 2 (3): e00078–11. doi :10.1128/mBio.00078-11. PMC 3101782 . PMID  21558432.