La visualización diferencial (también conocida como DDRT-PCR o DD-PCR ) es una técnica de laboratorio que permite a un investigador comparar e identificar cambios en la expresión genética a nivel de ARNm entre dos o más muestras de células eucariotas. [1] Fue el método más utilizado para comparar perfiles de expresión de dos muestras de células eucariotas en la década de 1990. [1] Para el año 2000, la visualización diferencial fue reemplazada por enfoques de microarrays de ADN . [2]
En la visualización diferencial, primero se realiza la transcripción inversa de todo el ARN de cada muestra utilizando un conjunto de cebadores 3 ′ "anclados " (que tienen una secuencia corta de nucleótidos de desoxitimidina al final) para crear una biblioteca de ADNc para cada muestra, seguido de la amplificación por PCR utilizando cebadores 3 ′ arbitrarios para la amplificación de la cadena de ADNc junto con cebadores 3 ′ anclados para la amplificación de la cadena de ARN, idénticos a los utilizados para crear la biblioteca; alrededor de cuarenta cebadores arbitrarios es el número óptimo para transcribir casi todo el ARNm. Luego, las transcripciones resultantes se separan por electroforesis y se visualizan, de modo que se puedan comparar. [1] El método era propenso a errores debido a que diferentes ARNm migraban a bandas individuales, diferencias en ARNm menos abundantes que se veían opacados por ARNm más abundantes, [1] sensibilidad a pequeños cambios en las condiciones de cultivo celular y una tendencia a amplificar fragmentos 3 ' en lugar de ARNm completos, y la necesidad de utilizar alrededor de 300 cebadores para capturar todo el ARNm. [3] : 316–317 El método se publicó por primera vez en Science en 1992. [1] [4]