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Transfección

La transfección es el proceso de introducir deliberadamente ácidos nucleicos desnudos o purificados en células eucariotas . [1] [2] También puede referirse a otros métodos y tipos de células, aunque a menudo se prefieren otros términos: " transformación " se utiliza normalmente para describir la transferencia de ADN no viral en bacterias y células eucariotas no animales , incluidas las células vegetales. En las células animales, la transfección es el término preferido ya que la transformación también se utiliza para referirse a la progresión a un estado canceroso ( carcinogénesis ) en estas células. La transducción se utiliza a menudo para describir la transferencia de genes mediada por virus a células eucariotas. [2] [3]

La palabra transfección es una combinación de trans- e infección . El material genético (como el ADN plasmídico superenrollado o las construcciones de ARNi ) puede ser transfectado. La transfección de células animales generalmente implica la apertura de poros transitorios o "agujeros" en la membrana celular para permitir la absorción de material. La transfección puede llevarse a cabo utilizando fosfato de calcio (es decir, fosfato tricálcico ), por electroporación , por compresión celular o mezclando un lípido catiónico con el material para producir liposomas que se fusionan con la membrana celular y depositan su carga en el interior.

La transfección puede dar lugar a morfologías y anomalías inesperadas en las células objetivo.

Terminología

El significado del término ha evolucionado. [4] El significado original de transfección era "infección por transformación", es decir, la introducción de material genético, ADN o ARN, de un virus o bacteriófago que infecta a procariotas en las células, lo que da como resultado una infección. Para el trabajo con células bacterianas y arqueales, la transfección conserva su significado original como un caso especial de transformación. Debido a que el término transformación tenía otro sentido en la biología celular animal (un cambio genético que permite la propagación a largo plazo en cultivo, o la adquisición de propiedades típicas de las células cancerosas), el término transfección adquirió, para las células animales, su significado actual de un cambio en las propiedades celulares causado por la introducción de ADN. [ cita requerida ]

Métodos

Existen varios métodos para introducir ADN extraño en una célula eucariota : algunos se basan en un tratamiento físico (electroporación, compresión celular, nanopartículas , magnetofección); otros se basan en materiales químicos o partículas biológicas (virus) que se utilizan como portadores. Existen muchos métodos diferentes de administración de genes desarrollados para varios tipos de células y tejidos, desde bacterias hasta mamíferos. En general, los métodos se pueden dividir en tres categorías: físicos, químicos y biológicos. [5]

Los métodos físicos incluyen electroporación , microinyección , pistola de genes , impalefección , presión hidrostática , infusión continua y sonicación. Los métodos químicos incluyen métodos como lipofección , que es un proceso de transfección de ADN mediado por lípidos que utiliza vectores liposómicos. También puede incluir el uso de portadores de genes poliméricos (poliplexos). [6] La transfección biológica generalmente está mediada por virus , que utilizan la capacidad de un virus para inyectar su ADN dentro de una célula huésped. Un gen que está destinado a ser administrado se empaqueta en una partícula viral deficiente en replicación. Los virus utilizados hasta la fecha incluyen retrovirus , lentivirus , adenovirus , virus adenoasociados y virus del herpes simple . [ cita requerida ]

Métodos físicos

Electroporador con formas de onda de decaimiento exponencial y onda cuadrada para aplicaciones de electroporación in vitro, in vivo, de células adherentes y de 96 pocillos. Fabricado por BTX Harvard Apparatus, Holliston MA, EE. UU.

Los métodos físicos son los más simples desde el punto de vista conceptual y utilizan medios físicos para forzar la entrada del material transfectado en el núcleo de la célula diana. El método físico más utilizado es la electroporación , en la que pulsos eléctricos cortos rompen la membrana celular, lo que permite que los ácidos nucleicos transfectados entren en la célula. [5] Otros métodos físicos utilizan medios diferentes para hacer agujeros en la membrana celular: la sonoporación utiliza ultrasonidos de alta intensidad (atribuidos principalmente a la cavitación de burbujas de gas que interactúan con las membranas celulares cercanas), la transfección óptica utiliza un láser altamente enfocado para formar un agujero de ~1 μm de diámetro. [7]

Varios métodos utilizan herramientas que fuerzan el ácido nucleico a entrar en la célula, a saber: microinyección de ácido nucleico con una aguja fina; [5] administración de partículas biolísticas , en la que el ácido nucleico se une a partículas de metales pesados ​​(generalmente oro) y se impulsa hacia las células a alta velocidad; [8] y magnetofección , donde los ácidos nucleicos se unen a partículas magnéticas de óxido de hierro y se impulsan hacia las células objetivo mediante imanes. [8]

La administración hidrodinámica es un método utilizado en ratones y ratas, en el que los ácidos nucleicos pueden administrarse al hígado inyectando un volumen relativamente grande en la sangre en menos de 10 segundos; casi todo el ADN se expresa en el hígado mediante este procedimiento. [9]

Métodos químicos

La transfección de base química se puede dividir en varios tipos: ciclodextrina , [10] polímeros, [11] liposomas o nanopartículas [12] (con o sin funcionalización química o viral. Ver más abajo).

Métodos virales

El ADN también se puede introducir en las células utilizando virus como portadores. En estos casos, la técnica se denomina transducción y se dice que las células son transducidas. Los vectores adenovirales pueden ser útiles para los métodos de transfección viral porque pueden transferir genes a una amplia variedad de células humanas y tienen altas tasas de transferencia. [2] Los vectores lentivirales también son útiles debido a su capacidad para transducir células que actualmente no están experimentando mitosis.

La fusión de protoplastos es una técnica en la que las células bacterianas transformadas se tratan con lisozima para eliminar la pared celular. A continuación, se utilizan agentes fusogénicos (por ejemplo, virus Sendai, PEG, electroporación) para fusionar el protoplasto portador del gen de interés con la célula receptora diana. Una desventaja importante de este método es que los componentes bacterianos también se introducen de forma no específica en la célula diana.

Transfección estable y transitoria

La transfección estable y transitoria difieren en sus efectos a largo plazo sobre una célula; una célula transfectada de forma estable expresará continuamente el ADN transfectado y lo transmitirá a las células hijas , mientras que una célula transfectada de forma transitoria expresará el ADN transfectado durante un breve período de tiempo y no lo transmitirá a las células hijas.

Para algunas aplicaciones de la transfección, es suficiente que el material genético transfectado se exprese sólo transitoriamente. Dado que el ADN introducido en el proceso de transfección normalmente no se integra en el genoma nuclear, el ADN extraño se diluirá a través de la mitosis o se degradará. [5] Las líneas celulares que expresan el antígeno nuclear 1 del virus de Epstein-Barr (VEB) (EBNA1) o el antígeno de T grande de SV40 permiten la amplificación episomal de plásmidos que contienen los orígenes de replicación virales de VEB (293E) o SV40 (293T), lo que reduce en gran medida la tasa de dilución. [25]

Si se desea que el gen transfectado permanezca realmente en el genoma de la célula y sus células hijas, debe producirse una transfección estable. Para lograr esto, se cotransfecta un gen marcador , lo que le da a la célula alguna ventaja seleccionable, como la resistencia a una determinada toxina . Algunas (muy pocas) de las células transfectadas habrán integrado, por casualidad, el material genético extraño en su genoma. Si luego se añade la toxina al cultivo celular, solo aquellas pocas células con el gen marcador integrado en sus genomas podrán proliferar , mientras que otras células morirán. Después de aplicar este estrés selectivo (presión de selección) durante algún tiempo, solo las células con una transfección estable permanecen y pueden seguir cultivándose. [26]

Los agentes comunes para seleccionar la transfección estable son:

Transfección de ARN

El ARN también se puede transfectar en células para expresar transitoriamente su proteína codificada o para estudiar la cinética de descomposición del ARN . La transfección del ARN se utiliza a menudo en células primarias que no se dividen.

Los ARNi también pueden transfectarse para lograr el silenciamiento del ARN (es decir, la pérdida de ARN y proteína del gen diana). Esto se ha convertido en una aplicación importante en la investigación para lograr la " eliminación " de proteínas de interés (por ejemplo, Endotelina-1 [27] ) con posibles aplicaciones en la terapia génica. Las limitaciones del enfoque de silenciamiento son la toxicidad de la transfección para las células y los posibles efectos "fuera del objetivo" en la expresión de otros genes/proteínas.

El ARN se puede purificar a partir de células después de la lisis o sintetizar a partir de nucleótidos libres , ya sea químicamente o enzimáticamente utilizando una ARN polimerasa para transcribir una plantilla de ADN . Al igual que con el ADN, el ARN se puede administrar a las células por una variedad de medios, incluyendo microinyección , electroporación y transfección mediada por lípidos . Si el ARN codifica una proteína , las células transfectadas pueden traducir el ARN en la proteína codificada. [28] Si el ARN es un ARN regulador (como un miARN ), el ARN puede causar otros cambios en la célula (como la eliminación mediada por ARNi ).

La encapsulación de la molécula de ARN en nanopartículas lipídicas fue un gran avance para producir vacunas de ARN viables , resolviendo una serie de barreras técnicas clave para la administración de la molécula de ARN a la célula humana. [29] [30]

Las moléculas de ARN más cortas que unos 25 nt (nucleótidos) evaden en gran medida la detección por parte del sistema inmunitario innato , que se activa con moléculas de ARN más largas. La mayoría de las células del cuerpo expresan proteínas del sistema inmunitario innato y, al exponerse a moléculas de ARN largas exógenas, estas proteínas inician cascadas de señalización que dan lugar a inflamación . Esta inflamación hipersensibiliza a la célula expuesta y a las células cercanas a la exposición posterior. Como resultado, mientras que una célula puede ser transfectada repetidamente con ARN corto con pocos efectos no específicos, la transfección repetida de células incluso con una pequeña cantidad de ARN largo puede causar la muerte celular a menos que se tomen medidas para suprimir o evadir el sistema inmunitario innato (ver "Transfección de ARN largo" a continuación).

La transfección de ARN corto se utiliza rutinariamente en la investigación biológica para inhibir la expresión de una proteína de interés (usando ARNi ) o para expresar o bloquear la actividad de un miARN (usando ARN corto que actúa independientemente de la maquinaria de ARNi de la célula y, por lo tanto, no se conoce como ARNi). Si bien también se pueden usar vectores basados ​​en ADN ( virus , plásmidos ) que codifican una molécula de ARN corto, la transfección de ARN corto no corre el riesgo de modificar el ADN de la célula, una característica que ha llevado al desarrollo del ARN corto como una nueva clase de fármacos macromoleculares . [31]

La transfección de ARN largo es el proceso de introducir deliberadamente moléculas de ARN de más de 25 nt en células vivas. Se hace una distinción entre la transfección de ARN corto y la de ARN largo porque las moléculas de ARN largo exógenas provocan una respuesta inmunitaria innata en las células que puede causar una variedad de efectos no específicos, como el bloqueo de la traducción , la detención del ciclo celular y la apoptosis .

ARN largo endógeno vs. exógeno

El sistema inmunológico innato ha evolucionado para proteger contra infecciones detectando patrones moleculares asociados a patógenos (PAMP) y desencadenando un conjunto complejo de respuestas conocidas colectivamente como " inflamación ". Muchas células expresan receptores de reconocimiento de patrones (PRR) específicos para ARN exógeno, incluidos los receptores tipo Toll 3,7,8 ( TLR3 , TLR7 , TLR8 ), [32] [33] [34] [ 35] la helicasa de ARN RIG1 (RARRES3) , [36] la proteína quinasa R (PKR, también conocida como EIF2AK2), [37] [38] miembros de la familia de proteínas de la oligoadenilato sintetasa ( OAS1 , OAS2 , OAS3 ) y otros. Todas estas proteínas pueden unirse específicamente a moléculas de ARN exógeno y desencadenar una respuesta inmune. Las características químicas, estructurales u otras características específicas de las moléculas de ARN largas que se requieren para el reconocimiento por los PRR siguen siendo en gran medida desconocidas a pesar de un estudio intenso. En un momento dado, una célula de mamífero típica puede contener varios cientos de miles de ARNm y otras moléculas de ARN largo reguladoras . Cómo las células distinguen el ARN largo exógeno de la gran cantidad de ARN largo endógeno es una importante pregunta abierta en biología celular . Varios informes sugieren que la fosforilación del extremo 5' de una molécula de ARN largo puede influir en su inmunogenicidad , y específicamente que el ARN 5'-trifosfato, que se puede producir durante la infección viral, es más inmunogénico que el ARN 5'-difosfato, el ARN 5'-monofosfato o el ARN que no contiene fosfato 5'. [39] [40] [41] [42] [43] [44] Sin embargo, el ARN largo transcrito in vitro (ivT) que contiene una tapa de 7-metilguanosina (presente en el ARNm eucariota ) también es altamente inmunogénico a pesar de no tener fosfato 5', [45] lo que sugiere que características distintas de la 5'-fosforilación pueden influir en la inmunogenicidad de una molécula de ARN.

El ARNm eucariota contiene nucleótidos modificados químicamente, como N 6 -metiladenosina , 5-metilcitidina y nucleótidos 2'-O-metilados . Aunque solo una cantidad muy pequeña de estos nucleótidos modificados están presentes en una molécula típica de ARNm, pueden ayudar a evitar que el ARNm active el sistema inmunológico innato al alterar la estructura secundaria que se parecería al ARN bicatenario (dsRNA), [46] [34] un tipo de ARN que se cree que está presente en las células solo durante la infección viral. La inmunogenicidad del ARN largo se ha utilizado para estudiar tanto la inmunidad innata como la adaptativa .

Transfección repetida de ARN largo

La inhibición de sólo tres proteínas, interferón-β , STAT2 y EIF2AK2 , es suficiente para rescatar a los fibroblastos humanos de la muerte celular causada por la transfección frecuente con ARN largo que codifica proteínas. [45] La inhibición de la señalización del interferón interrumpe el ciclo de retroalimentación positiva que normalmente hipersensibiliza a las células expuestas al ARN largo exógeno. Los investigadores han utilizado recientemente esta técnica para expresar proteínas de reprogramación en fibroblastos humanos primarios . [47]

Véase también

Referencias

  1. ^ Transfección en los encabezados de temas médicos (MeSH) de la Biblioteca Nacional de Medicina de EE. UU.
  2. ^ abc «Transfección». Guía de protocolos y aplicaciones . Promega. Archivado desde el original el 25 de junio de 2014 . Consultado el 25 de octubre de 2014 .
  3. ^ Transducción genética en los encabezados de materias médicas (MeSH) de la Biblioteca Nacional de Medicina de EE. UU.
  4. ^ "Transfección" en el Diccionario médico de Dorland
  5. ^ abcd Kim TK, Eberwine JH (agosto de 2010). "Transfección de células de mamíferos: el presente y el futuro". Química analítica y bioanalítica . 397 (8): 3173–8. doi :10.1007/s00216-010-3821-6. PMC 2911531 . PMID  20549496. 
  6. ^ Saul JM, Linnes MP, Ratner BD, Giachelli CM, Pun SH (noviembre de 2007). "Entrega de portadores de genes no virales desde estructuras de fibrina con plantilla esférica para la expresión sostenida de transgenes". Biomaterials . 28 (31): 4705–16. doi :10.1016/j.biomaterials.2007.07.026. PMID  17675152.
  7. ^ Tsukakoshi M, Kurata S, Nomiya Y, et al. (1984). "Un nuevo método de transfección de ADN mediante cirugía celular con microhaz láser". Applied Physics B: Photophysics and Laser Chemistry . 35 (3): 135–140. Bibcode :1984ApPhB..35..135T. doi :10.1007/BF00697702. S2CID  123250337.
  8. ^ ab Mehier-Humbert S, Guy RH (abril de 2005). "Métodos físicos para la transferencia de genes: mejora de la cinética de la administración de genes a las células". Adv Drug Deliv Rev. 57 ( 5): 733–53. doi :10.1016/j.addr.2004.12.007. PMID  15757758.
  9. ^ Suda T, Liu D (2015). "Entrega hidrodinámica". Vectores no virales para terapia génica: métodos físicos y traducción médica . Avances en genética. Vol. 89. págs. 89-111. doi :10.1016/bs.adgen.2014.10.002. ISBN 9780128022726. Número de identificación personal  25620009.
  10. ^ Menuel S, Fontanay S, Clarot I, Duval RE, Diez L, Marsura A (diciembre de 2008). "Capacidad de síntesis y formación de complejos de un nuevo tetrápodo dendrimérico de bis- (guanidinio)-tetrakis-(beta-ciclodextrina) como un sistema potencial de administración de genes (ADN y ARNi). Estudio de la transfección celular de ARNi". Química de bioconjugados . 19 (12): 2357–62. doi :10.1021/bc800193p. PMID  19053312.
  11. ^ Fischer D, von Harpe A, Kunath K, Petersen H, Li Y, Kissel T (2002). "Copolímeros de etilenimina y N-(2-hidroxietil)-etilenimina como herramientas para estudiar los efectos de la estructura del polímero en las propiedades fisicoquímicas y biológicas de los complejos de ADN". Química bioconjugada . 13 (5): 1124–33. doi :10.1021/bc025550w. PMID  12236795.
  12. ^ "Reactivos de transfección basados ​​en nanopartículas". Biology Transfection Research Resource . Transfection.ws. Archivado desde el original el 21 de abril de 2013 . Consultado el 30 de septiembre de 2009 .
  13. ^ Graham FL, van der Eb AJ (abril de 1973). "Una nueva técnica para el ensayo de infectividad del ADN del adenovirus humano 5". Virology . 52 (2): 456–67. doi :10.1016/0042-6822(73)90341-3. PMID  4705382.
  14. ^ Bacchetti S, Graham FL (abril de 1977). "Transferencia del gen de la timidina quinasa a células humanas deficientes en timidina quinasa mediante ADN viral del herpes simple purificado". Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 74 (4): 1590–4. Bibcode :1977PNAS...74.1590B. doi : 10.1073/pnas.74.4.1590 . PMC 430836 . PMID  193108. 
  15. ^ Kriegler M (1991). Transferencia y expresión: un manual de laboratorio . WH Freeman. págs. 96-97. ISBN 978-0-7167-7004-6.
  16. ^ Felgner PL, Gadek TR, Holm M, Roman R, Chan HW, Wenz M, Northrop JP, Ringold GM, Danielsen M (noviembre de 1987). "Lipofección: un procedimiento de transfección de ADN mediado por lípidos altamente eficiente". Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 84 (21): 7413–7. Bibcode :1987PNAS...84.7413F. doi : 10.1073/pnas.84.21.7413 . PMC 299306 . PMID  2823261. 
  17. ^ Felgner JH, Kumar R, Sridhar CN, Wheeler CJ, Tsai YJ, Border R, Ramsey P, Martin M, Felgner PL (enero de 1994). "Estudios mejorados de administración de genes y mecanismos con una nueva serie de formulaciones de lípidos catiónicos". The Journal of Biological Chemistry . 269 (4): 2550–61. doi : 10.1016/S0021-9258(17)41980-6 . PMID  8300583.
  18. ^ Pipes BL, Vasanwala FH, Tsang TC, Zhang T, Luo P, Harris DT (enero de 2005). "Un breve choque térmico aumenta la integración estable de las transfecciones de ADN mediadas por lípidos". BioTechniques . 38 (1): 48–52. doi : 10.2144/05381bm05 . PMID  15679084.[ enlace muerto permanente ]
  19. ^ Jacobsen LB, Calvin SA, Colvin KE, Wright M (junio de 2004). "Reactivo de transfección FuGENE 6: el poder suave". Métodos . Transfección de células de mamíferos. 33 (2): 104–12. doi :10.1016/j.ymeth.2003.11.002. PMID  15121164.
  20. ^ Hellgren I, Drvota V, Pieper R, Enoksson S, Blomberg P, Islam KB, Sylvén C (agosto de 2000). "Transferencia de genes mediada por células de alta eficiencia utilizando vectores no virales y FuGene6: estudios in vitro e in vivo". Ciencias de la vida celular y molecular . 57 (8–9): 1326–33. doi :10.1007/PL00000769. PMC 11146917 . PMID  11028922. S2CID  27916034. 
  21. ^ Lakshmipathy U, Thyagarajan B (2011). Células madre y primarias: tecnologías y aplicaciones de transferencia de genes (1.ª ed.). Wiley-Blackwell. ISBN 978-0-470-61074-9.
  22. ^ Arnold AS, Laporte V, Dumont S, Appert-Collin A, Erbacher P, Coupin G, Levy R, Poindron P, Gies JP (febrero de 2006). "Comparación de reactivos para la transfección eficiente de mioblastos primarios humanos: FuGENE 6, Effectene y ExGen 500". Farmacología fundamental y clínica . 20 (1): 81–9. doi :10.1111/j.1472-8206.2005.00344.x. PMID  16448398. S2CID  42585711.
  23. ^ Sapra, Rachit; Verma, Ram P.; Maurya, Govind P.; Dhawan, Sameer; Babu, Jisha; Haridas, V. (13 de noviembre de 2019). "Dendrímeros de proteínas y péptidos de diseño: un análisis transversal". Chemical Reviews . 119 (21): 11391–11441. doi :10.1021/acs.chemrev.9b00153. ISSN  0009-2665. PMID  31556597. S2CID  203435702.
  24. ^ Heitz, Marc; Javor, Sacha; Darbre, Tamis; Reymond, Jean-Louis (21 de agosto de 2019). "Dendrímeros peptídicos estereoselectivos sensibles al pH para la transfección de ARNip". Química bioconjugada . 30 (8): 2165–2182. doi :10.1021/acs.bioconjchem.9b00403. ISSN  1043-1802. PMID  31398014. S2CID  199519310.
  25. ^ Durocher Y, Perret S, Kamen A (enero de 2002). "Producción de proteínas recombinantes de alto nivel y alto rendimiento mediante transfección transitoria de células humanas 293-EBNA1 en suspensión". Nucleic Acids Research . 30 (2): 9e–9. doi :10.1093/nar/30.2.e9. PMC 99848 . PMID  11788735. 
  26. ^ Fanelli A (2016). "La ciencia de la generación de líneas celulares estables" . Consultado el 23 de diciembre de 2017 .
  27. ^ Mawji IA, Marsden PA (junio de 2006). "La transfección de ARN es una herramienta versátil para investigar la regulación postranscripcional de la endotelina-1". Experimental Biology and Medicine . 231 (6): 704–708. doi :10.3181/00379727-231-2310704 (inactivo el 12 de septiembre de 2024). PMID  16740984.{{cite journal}}: CS1 maint: DOI inactivo a partir de septiembre de 2024 ( enlace )
  28. ^ Herb M, Farid A, Gluschko A, Krönke M, Schramm M (noviembre de 2019). "Transfección altamente eficiente de macrófagos primarios con ARNm transcrito in vitro". Journal of Visualized Experiments (153). doi : 10.3791/60143 . PMID  31762462.
  29. ^ Cooney, Elizabeth (1 de diciembre de 2020). «Cómo la nanotecnología ayuda a que funcionen las vacunas de ARNm contra la COVID-19». Stat . Consultado el 3 de diciembre de 2020 .
  30. ^ Foley, Katherine Ellen (22 de diciembre de 2020). «Las primeras vacunas contra la COVID-19 han cambiado la biotecnología para siempre». Quartz . Quartz Media . Consultado el 11 de enero de 2021 .
  31. ^ Tansey B (11 de agosto de 2006). "El tratamiento de la degeneración macular interfiere con los mensajes del ARN". San Francisco Chronicle.
  32. ^ Alexopoulou L, Holt AC, Medzhitov R, Flavell RA (2001). "Reconocimiento de ARN bicatenario y activación de NF-kappaB por el receptor tipo Toll 3". Nature . 413 (6857): 732–738. Bibcode :2001Natur.413..732A. doi :10.1038/35099560. PMID  11607032. S2CID  4346537.
  33. ^ Kariko K, Ni H, Capodici J, Lamphier M, Weissman D (2004). "El ARNm es un ligando endógeno para el receptor tipo Toll 3". J Biol Chem . 279 (13): 12542–12550. doi : 10.1074/jbc.M310175200 . PMID  14729660.
  34. ^ ab Kariko K, Buckstein M, Ni H, Weissman D (2005). "Supresión del reconocimiento de ARN por receptores tipo Toll: el impacto de la modificación de nucleósidos y el origen evolutivo del ARN". Inmunidad . 23 (2): 165–175. doi : 10.1016/j.immuni.2005.06.008 . PMID  16111635.
  35. ^ Diebold SS, Kaisho T, Hemmi H, Akira S, Reis y Sousa C (2004). "Respuestas antivirales innatas mediante el reconocimiento de ARN monocatenario mediado por TLR7". Science . 303 (5663): 1529–1531. Bibcode :2004Sci...303.1529D. doi : 10.1126/science.1093616 . PMID  14976261. S2CID  33144196.
  36. ^ Yoneyama M, Kikuchi M, Natsukawa T, Shinobu N, Imaizumi T, et al. (2004). "La helicasa de ARN RIG-I tiene una función esencial en las respuestas antivirales innatas inducidas por ARN bicatenario". Nat Immunol . 5 (7): 730–737. doi :10.1038/ni1087. PMID  15208624. S2CID  34876422.
  37. ^ Das HK, Das A, Ghosh-Dastidar P, Ralston RO, Yaghmai B, et al. (1981). "Síntesis de proteínas en reticulocitos de conejo. Purificación y caracterización de un inhibidor de la síntesis de proteínas dependiente de ARN bicatenario a partir de lisados ​​de reticulocitos". J Biol Chem . 256 (12): 6491–6495. doi : 10.1016/S0021-9258(19)69192-1 . PMID  7240221.
  38. ^ Levin DH, Petryshyn R, London IM (1981). "Caracterización de la quinasa alfa eIF-2 activada por ARN bicatenario purificada de reticulocitos de conejo". J Biol Chem . 256 (14): 7638–7641. doi : 10.1016/S0021-9258(19)69008-3 . PMID  6265457.
  39. ^ Hornung V, Ellegast J, Kim S, Brzozka K, Jung A, et al. (2006). "El ARN 5'-trifosfato es el ligando para RIG-I". Science . 314 (5801): 994–997. Bibcode :2006Sci...314..964H. doi : 10.1126/science.1132505 . PMID  17038590. S2CID  22436759.
  40. ^ Saito T; Owen DM; Jiang F; Marcotrigiano J; Gale M, Jr. (2008). "Inmunidad innata inducida por el reconocimiento de RIG-I dependiente de la composición del ARN del virus de la hepatitis C". Nature . 454 (7203): 523–527. Bibcode :2008Natur.454..523S. doi :10.1038/nature07106. PMC 2856441 . PMID  18548002. 
  41. ^ Takahasi K, Yoneyama M, Nishihori T, Hirai R, Kumeta H, et al. (2008). "Mecanismo de detección de ARN no propio de la helicasa RIG-I y activación de respuestas inmunitarias antivirales". Mol Cell . 29 (4): 428–440. doi : 10.1016/j.molcel.2007.11.028 . PMID  18242112.
  42. ^ Yoneyama M, Fujita T (2008). "Mecanismo estructural del reconocimiento de ARN por los receptores tipo RIG-I". Inmunidad . 29 (2): 178–181. doi : 10.1016/j.immuni.2008.07.009 . PMID  18701081.
  43. ^ Schmidt A, Schwerd T, Hamm W, Hellmuth JC, Cui S, et al. (2009). "El ARN 5'-trifosfato requiere estructuras con pares de bases para activar la señalización antiviral a través de RIG-I". Proc Natl Acad Sci USA . 106 (29): 12067–12072. Bibcode :2009PNAS..10612067S. doi : 10.1073/pnas.0900971106 . PMC 2705279 . PMID  19574455. 
  44. ^ Schlee M, Roth A, Hornung V, Hagmann CA, Wimmenauer V, et al. (2009). "El reconocimiento del 5'-trifosfato por la helicasa RIG-I requiere ARN bicatenario corto y romo como el contenido en el extremo del virus de cadena negativa". Inmunidad . 31 (1): 25–34. doi :10.1016/j.immuni.2009.05.008. PMC 2824854 . PMID  19576794. 
  45. ^ ab Angel M, Yanik MF (2010). "La supresión inmunitaria innata permite la transfección frecuente con proteínas de reprogramación que codifican ARN". PLOS ONE . ​​5 (7): e11756. Bibcode :2010PLoSO...511756A. doi : 10.1371/journal.pone.0011756 . PMC 2909252 . PMID  20668695. 
  46. ^ Herb M, Farid A, Gluschko A, Krönke M, Schramm M (noviembre de 2019). "Transfección altamente eficiente de macrófagos primarios con ARNm transcrito in vitro". Journal of Visualized Experiments (153). doi : 10.3791/60143 . PMID  31762462.
  47. ^ Trafton A (26 de julio de 2010). "El ARN ofrece una forma más segura de reprogramar las células". Oficina de noticias del MIT.

Lectura adicional

Enlaces externos

Scholia tiene un perfil de transfección (Q1429031).