La temporada 2000-01 de la Gamma Ethniki fue la 18.ª desde el establecimiento oficial de la tercera división del fútbol griego en 1983. El Patraikos se coronó campeón, logrando así el ascenso a la Beta Ethniki . [1] El Chalkidona-Near East también logró el ascenso tras ganar un play-off de ascenso en el que participó con el Atromitos y el Ethnikos Piraeus . [1]
Acharnaikos , Naoussa , Kozani , Ampelokipi, Lamia , Veria , Anagennisi Karditsa , ILTEX Lykoi , Pierikos e Ialysos Rodos descendieron a Delta Ethniki . [1]