La prueba de manchas de sangre seca (DBS) es una forma de muestreo biológico en la que las muestras de sangre se secan y se secan en papel de filtro. Las muestras secas pueden enviarse fácilmente a un laboratorio analítico y analizarse mediante diversos métodos, como la amplificación de ADN o la cromatografía líquida de alto rendimiento . [ cita necesaria ]
Ivar Bang describió por primera vez la DBS como un método de muestreo inusual en 1913. [1] El concepto de que la sangre capilar, obtenida al pinchar el talón o el dedo y secada en papel de filtro, podría usarse para detectar enfermedades metabólicas en grandes poblaciones de recién nacidos fue introducido en Escocia por Robert Guthrie en 1963. La detección neonatal de fenilcetonuria se extendió a todo el país en 1969-1970. Desde entonces, se han recolectado rutinariamente muestras de tarjetas Guthrie de bebés en más de 20 países para detectar fenilcetonuria y, más recientemente, hipotiroidismo congénito , anemia falciforme e infección por VIH. Las limitaciones de sensibilidad y especificidad al examinar volúmenes de sangre tan pequeños restringieron el uso de gotas de sangre seca durante muchos años. Sin embargo, avances recientes como la producción de anticuerpos monoclonales , la expresión de proteínas sintéticas y la introducción de la reacción en cadena de la polimerasa han superado muchos de estos problemas. [2]
Este tipo de análisis de sangre ahora está disponible para uso doméstico por parte de los consumidores en los EE. UU. Los análisis de sangre disponibles incluyen vitamina D, estrógeno, testosterona, cortisol, TSH y lípidos. Nueva York es el único estado que prohíbe las pruebas de sangre en el hogar. [ cita necesaria ]
Las muestras de sangre seca se recogen aplicando unas gotas de sangre, extraídas con una lanceta del dedo de la mano, el talón o el pie, sobre un papel de filtro absorbente especialmente fabricado. Se deja que la sangre sature completamente el papel. Se seca al aire durante varias horas. [3] Las muestras se almacenan en bolsas de plástico de baja permeabilidad a los gases con un desecante agregado para reducir la humedad y pueden mantenerse a temperatura ambiente, incluso en climas tropicales. [ cita necesaria ]
Una vez en el laboratorio, los técnicos separan un pequeño disco de papel saturado de la hoja utilizando una perforadora manual o automática, dejando caer el disco en una placa de microtitulación de fondo plano. La sangre se eluye en solución salina tamponada con fosfato que contiene Tween 80 al 0,05 % y azida sódica al 0,005 % durante la noche a 4 °C. La placa resultante que contiene los eluatos forma el "maestro" a partir del cual se pueden realizar diluciones para pruebas posteriores. [2]
Como alternativa a perforar un disco de papel, las soluciones de automatización recientes extraen la muestra haciendo pasar un eluyente a través del filtro sin perforarlo. [4] [5] La empresa suiza CAMAG desarrolló una automatización que incluye la aplicación de un estándar interno previa extracción. [6]
La tecnología es prometedora para ampliar los servicios de diagnóstico a los bebés infectados por el VIH en entornos de escasos recursos debido a la vida útil más larga de las muestras, la menor necesidad de refrigeración y la naturaleza menos invasiva de la prueba en comparación con otros métodos. A diferencia de la prueba ELISA para detectar anticuerpos contra el VIH en la sangre, que pueden transmitirse a los bebés durante el embarazo independientemente del virus en sí, la prueba de sangre seca se puede utilizar para detectar el material genético del virus real, evitando así la probabilidad de un falso positivo. resultado. La prueba de detección del VIH con gotas de sangre seca no se considera lo suficientemente sensible como prueba de diagnóstico, pero puede ser útil para estimar la prevalencia del VIH mediante la vigilancia. Las muestras de sangre seca también presentan un menor riesgo biológico para quienes las manipulan y son más fáciles de transportar o almacenar que las muestras de sangre líquida. [7]
Los DBS son atractivos para los biobancos debido a su bajo costo y su recolección y almacenamiento fáciles de usar. Un estudio reveló que podían recolectar fácilmente grandes cantidades de muestras de sangre seca de donantes. El valor médico potencial de estos biobancos es grande debido a su capacidad para detectar niveles de proteínas y otros biomarcadores sanguíneos. [8]
La razón de la estabilidad del ADN, ARN o proteína podría atribuirse al hecho de que el material biológico se une a la matriz del papel de filtro y el proceso de secado excluye el agua, que es un factor importante necesario para que actúen las proteasas o nucleasas. La unión del material biológico también une varios inhibidores que pueden interferir con diversos métodos de amplificación de ácidos nucleicos. [ cita necesaria ]