El tampón TE es una solución tampón de uso común en biología molecular , especialmente en procedimientos que involucran ADN , ADNc o ARN . "TE" se deriva de sus componentes: Tris , un tampón de pH común, y EDTA , una molécula que quela cationes como Mg 2+ . El propósito del tampón TE es solubilizar el ADN o ARN, al mismo tiempo que lo protege de la degradación.
Una receta típica para hacer un buffer TE 1X es:
El tampón TE también se conoce como tampón T 10 E 1 , que puede leerse como "tampón T diez E uno". Para preparar una solución de 100 ml de tampón T 10 E 1 , se mezclan 1 ml de base Tris 1 M (pH 10-11) y 0,2 ml de EDTA (0,5 M) y se completa con agua bidestilada hasta 100 ml. Se añaden microlitros de HCl de alta molaridad para reducir el pH a 8.
Según estudios de nucleasas de la década de 1980, el pH generalmente se ajusta a 7,5 para el ARN y a 8,0 para el ADN . [ cita requerida ] Se supone que las respectivas nucleasas de ADN y ARN son menos activas a estos valores de pH, pero un pH de 8,0 se puede usar de manera segura para el almacenamiento tanto de ADN como de ARN [ cita requerida ] .
El EDTA inactiva aún más la DNasa al unirse a los cationes metálicos requeridos por esta enzima. [1]
El ADN genómico y plasmídico se puede almacenar en tampón TE a 4 °C (39,2 °F) para uso a corto plazo, o a una temperatura de -20 °C (-4 °F) a -80 °C (-112 °F) para almacenamiento a largo plazo. Se deben evitar los ciclos repetidos de congelación y descongelación. [2]
El funcionamiento del buffer TE se basa en quelar cationes metálicos como el Mg2 + . El problema es que la PCR polimerasa también requiere Mg2 + para funcionar, por lo que si la cantidad de EDTA es demasiado alta puede afectar a la PCR. Existe una versión de buffer TE con 10 veces menos cantidad de EDTA que se utiliza muy frecuentemente para los kits STR forenses. Debido al uso de kits con amplificación multiplex, es necesario tener una menor cantidad de EDTA en la muestra para no interferir con el Mg2 + presente en la reacción. Si se utiliza buffer TE regular para diluir la muestra, se observará un desequilibrio en el perfil de ADN, mientras que Low TE tendrá un mejor equilibrio. El buffer Low TE o buffer TE Low EDTA está compuesto por 10 mM Tris-HCl (pH 8.0) + 0.1 mM EDTA.
Tampón TE pH 7,4 = 100 mM/L Tris (pH 7,4) + 10 mM/L EDTA (pH 8,0) de Clonación molecular: manual de laboratorio