El suero fetal bovino ( SFB ) se obtiene a partir de la sangre extraída de un feto bovino mediante un sistema cerrado de recolección en el matadero . El suero fetal bovino es el suplemento sérico más utilizado para el cultivo celular in vitro de células eucariotas . Esto se debe a que tiene un nivel muy bajo de anticuerpos y contiene más factores de crecimiento , lo que le permite versatilidad en muchas aplicaciones diferentes de cultivo celular.
La proteína globular , albúmina sérica bovina (BSA), es un componente importante del suero bovino fetal. La rica variedad de proteínas del suero bovino fetal mantiene las células cultivadas en un medio en el que pueden sobrevivir, crecer y dividirse.
Debido a que es un producto biológico, el FBS no es un componente de medios completamente definido y, como tal, varía en composición entre lotes. [1] Como resultado de esto y en un intento de minimizar la posibilidad de transferencia de agentes adventicios, se han desarrollado medios sin suero y químicamente definidos (CDM). Sin embargo, la eficacia de los medios sin suero es limitada ya que muchas líneas celulares aún requieren suero para crecer y muchas formulaciones de medios sin suero solo pueden soportar el crecimiento de tipos de células estrictamente definidos. [2]
El FBS es un subproducto de la industria cárnica . El FBS, al igual que la gran mayoría del suero animal utilizado en cultivos celulares, se produce a partir de sangre extraída en mataderos comerciales de ganado que también suministra carne destinada al consumo humano. [3]
La primera etapa del proceso de producción de suero bovino con suero fetal bovino (FBS) es la recolección de sangre del feto bovino después de que se lo extrae de la vaca sacrificada. El feto muere por falta de oxígeno al permanecer en el ambiente protector del útero durante un mínimo de 15 a 20 minutos después de que la vaca muere. [4] La sangre se recolecta asépticamente en un recipiente estéril o una bolsa de sangre y luego se deja coagular. El método normal de recolección es la punción cardíaca. Esto minimiza el peligro de contaminación del suero con microorganismos del propio feto y del medio ambiente, al tiempo que maximiza el volumen de sangre recolectada. Luego se centrifuga para eliminar el coágulo de fibrina y las células sanguíneas restantes del suero de color amarillo claro (pajizo). El suero se congela antes de su posterior procesamiento, que es necesario para que sea apto para el cultivo celular. [5]
La segunda etapa del procesamiento implica la filtración, que generalmente se realiza mediante una cadena de filtración y la filtración final se realiza a través de tres filtros de membrana estériles de 0,1 micras. El suero fetal bovino procesado asépticamente se somete a pruebas de control de calidad rigurosas y se entrega con un Certificado de análisis detallado. El certificado proporciona los resultados completos de las pruebas e información sobre el origen del suero. Los certificados de análisis varían entre los proveedores comerciales, pero cada uno suele incluir los siguientes detalles: declaración de filtración, país de recolección de sangre, país de fabricación, pruebas de rendimiento de crecimiento celular, pruebas de esterilidad microbiana, así como detección de micoplasma y virus, endotoxina , hemoglobina, IgG gamma glutamil transferasa [6] y ensayos de proteínas totales. El suero fetal bovino también puede analizarse para determinar el país de recolección. [7]
Se han planteado cuestiones éticas en relación con el proceso de recolección de sangre debido al posible sufrimiento causado al feto. Se ha debatido sobre las metodologías para la recolección de suero bovino fetal. La Asociación Internacional de la Industria del Suero (ISIA) ha publicado literatura [8] [9] que proporciona detalles sobre la amplia regulación y los procesos empleados para garantizar que el suero se recolecte de manera ética. Aunque el acto de sacrificar a la madre y el tiempo que pasa en el proceso de sacrificio antes de la recolección inducirán la inconsciencia o la muerte del feto antes de la recolección del suero, se ha postulado que la exposición de terneros vivos no nacidos al oxígeno podría hacer que adquieran conciencia antes de ser sacrificados, lo que da lugar a un debate activo sobre la ética de la recolección de suero. [10] [11] Si bien la Asociación de la Industria acepta que ciertas organizaciones tienen preocupaciones, sostiene que todas las recolecciones de suero se realizan bajo supervisión veterinaria en mataderos registrados controlados por la autoridad competente en el país de recolección.
El suero fetal bovino está disponible comercialmente a través de muchos fabricantes y, como las células cultivadas in vitro son muy sensibles, los clientes suelen probar lotes específicos para comprobar su idoneidad para su tipo celular específico. Al cambiar de lote, es habitual adaptar las células al nuevo lote de material, por ejemplo, mezclando el 50 % del suero antiguo con el 50 % del suero nuevo y dejando que las células se aclimaten al nuevo material.
El suero se almacena congelado para preservar la estabilidad de los componentes, como los factores de crecimiento. Cuando se descongela el suero, puede observarse cierta precipitación. Este es un fenómeno normal y no compromete la calidad del suero de ninguna manera. El precipitado se puede eliminar transfiriendo el suero a tubos estériles y centrifugándolo durante 5 minutos a 400 × g. Para limitar la cantidad de precipitación, se recomienda descongelar el suero en un refrigerador a 2-8˚C. El suero debe agitarse regularmente durante este proceso. Se deben evitar los ciclos repetidos de congelación/descongelación y es aconsejable dispensar el suero en alícuotas de un solo uso antes de congelarlo. [12]
El suero producido para su uso en la industria biotecnológica y en los sectores de investigación está muy regulado. La recogida y el movimiento de todos los productos derivados de animales a nivel mundial están estrictamente controlados. El control veterinario de los productos derivados de animales sigue en gran medida las regulaciones establecidas por la UE (DG SANCO) y los EE. UU. (USDA). La regulación actual que rige la importación de subproductos animales a la UE está cubierta por el Reglamento (UE) 1069/2009 y el documento de implementación Reglamento (UE) 142/2011.
FBS es un producto que se recopila en todo el mundo y cuyas principales colecciones se centran en Estados Unidos, Australia, Nueva Zelanda, Canadá, América Central, América del Sur y Europa.
Se estima que las ventas de FBS en 2008 fueron de 700.000 litros a nivel mundial. [ cita requerida ] Una fuente de 2012 estima que se producen alrededor de 600.000 litros anualmente, un tercio de los cuales es adecuado para uso farmacéutico según las Buenas Prácticas de Fabricación . Se requieren de 1 a 3 fetos para producir un litro de suero. [13]
Los reemplazos propuestos para FBS incluyen:
