Compuesto químico
El suberato de disuccinimidilo (DSS) es un agente reticulante no escindible, reactivo a la lisina de seis carbonos .
Consiste en grupos funcionales Es un éster de N-hidroxisuccinimida (NHS) homobifuncional formado por activación de carbodiimida de moléculas de carboxilato, con grupos reactivos idénticos en cada extremo. [2] Los grupos reactivos están separados por un espaciador y en esta molécula es una cadena alquílica de seis carbonos. [3] Este reactivo se utiliza principalmente para formar enlaces cruzados intramoleculares y preparación de polímeros a partir de monómeros . Es ideal para la reticulación del ligando del receptor.
El DSS es reactivo con los grupos amina (aminas primarias) a un pH de 7,0 a 9,0. Es permeable a la membrana, lo que permite la reticulación intracelular, tiene una alta pureza, no se escinde y es insoluble en agua (debe disolverse en un disolvente orgánico polar como DMF o DMSO antes de añadirlo a la muestra). [4]
Su especificidad de reacción, la estabilidad del producto de reacción y la falta de subproductos de reacción lo convierten en un agente de reticulación de uso común. [3]
Aplicaciones
- Reticulación química de proteínas intracelulares antes de la lisis celular y la inmunoprecipitación
- 'Reparar' interacciones proteicas para permitir la identificación de interacciones proteicas débiles o transitorias
- Reticulación de proteínas para crear bioconjugados mediante reacciones de un solo paso
- Inmovilizar proteínas sobre superficies recubiertas de amina [5]
- La espectrometría de masas de reticulación (MS de reticulación) proporciona información sobre la estructura, la organización y las interacciones de las proteínas [6]
Cromatografía de exclusión por tamaño
Se realizó un estudio para analizar la aplicación de la cromatografía de exclusión por tamaño en la purificación de péptidos reticulados en muestras. Cuando se analizaron los péptidos eluidos, los péptidos reticulados se pudieron detectar en concentraciones más altas en las fracciones anteriores, eluyendo antes que los péptidos modificados o no modificados. [7]
Reticulación con hemoglobina-albúmina
La reactividad del suberato de disuccinimidilo hacia las aminas primarias le permite servir como agente de reticulación de proteínas, sin productos secundarios tóxicos y formando enlaces peptídicos con los residuos de lisina en un solo paso. En un estudio sobre sustitutos de la sangre, se demostró que el DSS reticulaba la hemoglobina intramolecularmente, produciendo una proteína relativamente estable (Hb polimerizada o poliHb), cuya afinidad por el oxígeno se redujo casi a la mitad en comparación con la de la Hb nativa. Se demostró que esto se revertía cuando la hemoglobina se copolimerizaba con albúmina de suero bovino (BSA), mostrando muy pocos cambios en la autooxidación y la afinidad por el oxígeno en comparación con la Hb nativa. [8]
Véase también
Referencias
- ^ Éster de bis(N-hidroxisuccinimida) del ácido subérico en Sigma-Aldrich
- ^ Manual de reactivos de reticulación (PDF) . Thermo Fisher Scientific. 2012.
- ^ ab Belsom A, Rappsilber J (febrero de 2021). "Anatomía de un reticulante". Current Opinion in Chemical Biology . Omics. 60 : 39–46. doi : 10.1016/j.cbpa.2020.07.008 . hdl : 20.500.11820/7655d96c-59ea-43da-96b1-fdce03f2ae84 . PMID 32829152.
- ^ Leitner A, Walzthoeni T, Kahraman A, Herzog F, Rinner O, Beck M, Aebersold R (agosto de 2010). "Sondeo de estructuras proteicas nativas mediante reticulación química, espectrometría de masas y bioinformática". Molecular & Cellular Proteomics . 9 (8): 1634–1649. doi : 10.1074/mcp.R000001-MCP201 . PMC 2938055 . PMID 20360032.
- ^ "DSS (suberato de disuccinimidilo)". www.thermofisher.com . Consultado el 23 de abril de 2022 .
- ^ Graziadei A, Rappsilber J (enero de 2022). "Aprovechamiento de la espectrometría de masas de reticulación en biología estructural y celular". Structure . 30 (1): 37–54. doi : 10.1016/j.str.2021.11.007 . PMID 34895473.
- ^ Holding AN (noviembre de 2015). "XL-MS: Entrecruzamiento de proteínas acoplado con espectrometría de masas". Métodos . Biología estructural basada en espectrometría de masas. 89 : 54–63. doi : 10.1016/j.ymeth.2015.06.010 . PMID 26079926.
- ^ Scurtu F, Zolog O, Iacob B, Silaghi-Dumitrescu R (febrero de 2014). "Enlace cruzado de hemoglobina y albúmina con suberato de disuccinimidilo (DSS) y/o glutaraldehído para sustitutos de la sangre". Células artificiales, nanomedicina y biotecnología . 42 (1): 13–17. doi : 10.3109/21691401.2012.762652 . PMID 23342991.
