El dot blot (o slot blot ) es una técnica de biología molecular que se utiliza para detectar proteínas. Representa una simplificación del método western blot , con la excepción de que las proteínas que se van a detectar no se separan primero mediante electroforesis , sino que se aplica la muestra directamente sobre una membrana en un solo punto y se realiza el procedimiento de transferencia.
La técnica ofrece un importante ahorro de tiempo, ya que no se requieren procedimientos complejos de transferencia del gel, ya que no se requiere la cromatografía o la electroforesis en gel . Sin embargo, no ofrece información sobre el tamaño de la proteína diana. [1]
La realización de un dot blot es similar en idea a la realización de un western blot, con la ventaja de una mayor velocidad y un menor costo. [2] Los dot blots también se realizan para evaluar las capacidades de unión de un anticuerpo. [3]
Un protocolo general de transferencia puntual implica colocar 1 o 2 microlitros de una muestra sobre una membrana de nitrocelulosa o PVDF y dejarla secar al aire. Las muestras pueden estar en forma de sobrenadantes de cultivo de tejidos, suero sanguíneo, extractos de células u otras preparaciones. [4] Después de colocar las muestras de proteína sobre la membrana, esta se coloca en un recipiente de plástico y se incuba secuencialmente en tampón de bloqueo, soluciones de anticuerpos o tampón de enjuague en un agitador. Después de la unión de los anticuerpos, la membrana se incuba con un sustrato quimioluminiscente y se toman imágenes.
Se ha utilizado un aparato de transferencia puntual asistida por vacío para facilitar el proceso de enjuague e incubación mediante el uso del vacío para extraer la solución de debajo de la membrana, que está ensamblada entre varias capas de placas para garantizar un buen sellado entre los pocillos de muestra, retener la solución de desecho y proporcionar fuerza de succión. Para la detección de señales de quimioluminiscencia, es necesario desmontar el aparato y sacar la membrana y envolverla en una película de plástico transparente.