La electroforesis discontinua (coloquialmente electroforesis en disco [a] ) es un tipo de electroforesis en gel de poliacrilamida . Fue desarrollado por Ornstein y Davis. [2] [1] Este método produce alta resolución y buena definición de banda. Es una técnica ampliamente utilizada para separar proteínas según su tamaño y carga. [3]
En este método, el gel se divide en dos partes discontinuas , gel de resolución y apilamiento, ambos tienen diferentes concentraciones de poliacrilamida. [4] El que tiene menor concentración se apila encima del que tiene mayor concentración. La discontinuidad se basa en cuatro parámetros: estructura del gel, valor de pH del tampón, fuerza iónica del tampón y la naturaleza de los iones en el gel y el tampón del electrodo. El tampón del electrodo contiene glicina . La glicina tiene una carga neta muy baja a pH 6,8 del gel de apilamiento, por lo que tiene baja movilidad . Las proteínas se separan según el principio de isotacoforesis y se apilan según su movilidad (efecto de apilamiento). La movilidad depende de la carga neta, no del tamaño de la molécula. Las proteínas se mueven lentamente hacia el ánodo a velocidad constante hasta alcanzar el límite de separación del gel. De repente, la resistencia a la fricción aumenta, pero la glicina no se ve afectada, pasa las proteínas y se carga mucho en la zona de resolución. Las proteínas presentes en un tampón homogéneo comienzan a separarse según los principios de la electroforesis zonal. Ahora su movilidad depende tanto del tamaño como de la carga. El valor del pH aumenta a 9,5 y la carga neta aumenta. [5] [6]