La separación de ADN por adsorción de sílice es un método de separación de ADN que se basa en la unión de moléculas de ADN a superficies de sílice en presencia de ciertas sales y bajo ciertas condiciones de pH . [1] [2]
Para separar el ADN mediante adsorción con sílice, primero se lisa una muestra , liberando proteínas , ADN , fosfolípidos , etc. de las células. El tejido restante se descarta. El sobrenadante que contiene el ADN se expone luego a sílice en una solución con alta fuerza iónica. Las mayores eficiencias de adsorción de ADN se producen en presencia de una solución tampón con un pH igual o inferior al pKa de los grupos silanol de la superficie.
El mecanismo detrás de la adsorción de ADN sobre sílice no se entiende completamente; una posible explicación implica la reducción de la carga negativa de la superficie de sílice debido a la alta fuerza iónica del tampón. [ cita requerida ] Esta disminución en la carga de la superficie conduce a una disminución en la repulsión electrostática entre el ADN cargado negativamente y la sílice cargada negativamente. Mientras tanto, el tampón también reduce la actividad del agua formateando iones hidratados. Esto hace que la superficie de sílice y el ADN se deshidraten. Estas condiciones conducen a una situación energéticamente favorable para que el ADN se adsorba a la superficie de sílice. [ cita requerida ]
Otra explicación de cómo el ADN se une a la sílice se basa en la acción del cloruro de guanidinio (GuHCl), que actúa como un caótropo. [3] Un caótropo desnaturaliza las biomoléculas al alterar la capa de hidratación que las rodea. Esto permite que los iones con carga positiva formen un puente salino entre la sílice con carga negativa y la cadena principal del ADN con carga negativa en una concentración alta de sal. Luego, el ADN se puede lavar con mucha sal y etanol y, en última instancia, eluir con poca sal.
Una vez que el ADN se une a la sílice, se lava para eliminar los contaminantes y finalmente se eluye utilizando un tampón de elución o agua destilada. [4]