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1-Fluoro-2,4-dinitrobenceno

El 1-fluoro-2,4-dinitrobenceno (comúnmente llamado reactivo de Sanger , dinitrofluorobenceno , DNFB o FDNB ) es una sustancia química que reacciona con el aminoácido N-terminal de los polipéptidos . Esto puede ser útil para la secuenciación de proteínas .

Preparación

En 1936, Gottlieb presentó una síntesis en la que el 1-cloro-2,4-dinitrobenceno reaccionó con fluoruro de potasio (KF) en nitrobenceno : [3]

Síntesis de 1-fluoro-2,4-dinitrobenceno a partir de 1-cloro-2,4-dinitrobenceno en nitrobenceno con fluoruro de potasio

Usos

Frederick Sanger

En 1945, Frederick Sanger describió su uso para determinar el aminoácido N-terminal en cadenas polipeptídicas, en particular la insulina . [4] Los resultados iniciales de Sanger sugirieron que la insulina era una molécula más pequeña de lo que se había estimado previamente (peso molecular 12.000), y que consistía en cuatro cadenas (dos terminadas en glicina y dos terminadas en fenilalanina ), con las cadenas reticuladas por enlaces disulfuro . Sanger continuó trabajando en la insulina, utilizando dinitrofluorobenceno en combinación con otras técnicas, y finalmente dio como resultado la secuencia completa de la insulina (que consta de solo dos cadenas, con un peso molecular de 6.000). [5]

Tras el informe inicial de Sanger sobre el reactivo, el método del dinitrofluorobenceno fue ampliamente adoptado para estudiar proteínas, hasta que fue reemplazado por otros reactivos para el análisis terminal (por ejemplo, cloruro de dansilo y posteriormente aminopeptidasas y carboxipeptidasas ) y otros métodos generales para la determinación de secuencias (por ejemplo, degradación de Edman ). [5]

El dinitrofluorobenceno reacciona con el grupo amino de los aminoácidos para producir dinitrofenilaminoácidos . Estos DNP-aminoácidos son moderadamente estables en condiciones de hidrólisis ácida que rompen los enlaces peptídicos . Los DNP-aminoácidos pueden entonces recuperarse y la identidad de esos aminoácidos puede descubrirse mediante cromatografía . Más recientemente, el reactivo de Sanger también se ha utilizado para el análisis bastante difícil de distinguir entre las formas reducidas y oxidadas de glutatión y cisteína en sistemas biológicos junto con HPLC. Este método es lo suficientemente robusto como para que pueda realizarse en matrices tan complejas como la sangre o el lisado celular. [6] [7]

Método de Sanger para el análisis de grupos terminales de péptidos: A derivatización del extremo N -terminal con reactivo de Sanger (DNFB), B hidrólisis ácida total del péptido dinitrofenilo

Véase también

Referencias

  1. ^ de la hoja de datos de seguridad de Oxford
  2. ^ abc CRC Handbook of Chemistry and Physics , 90. edición, CRC Press, Boca Raton, Florida, 2009, ISBN  978-1-4200-9084-0 , Sección 3, Constantes físicas de compuestos orgánicos , pág. 3-260.
  3. ^ Billroth Gottlieb, Hans (1936). "La sustitución del cloro por flúor en compuestos orgánicos". J. Am. Chem. Soc. 58 (3): 532–533. doi :10.1021/ja01294a502.
  4. ^ Sanger, F (1945). "Los grupos amino libres de la insulina". The Biochemical Journal . 39 (5): 507–15. doi :10.1042/bj0390507. PMC 1258275 . PMID  16747948. 
  5. ^ de Joseph Fruton , Proteínas, enzimas, genes: la interacción entre la química y la biología . New Haven: Yale University Press, 1999. pág. 216.
  6. ^ Dominick, Pamela K.; Cassidy, Pamela B.; Roberts, Jeanette C. (2001). "Un método nuevo y versátil para la determinación de tiolaminas de importancia biológica". Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications . 761 (1): 1–12. doi :10.1016/S0378-4347(01)00298-5. PMID  11585123.
  7. ^ Bronowicka-Adamska, Patrycja; Zagajewski, Jacek; Czubak, Jerzy; Wróbel, Maria (2011). "Método RP-HPLC para la determinación cuantitativa de cistationina, cisteína y glutatión: una aplicación para el estudio del metabolismo de la cisteína en el cerebro humano". Journal of Chromatography B . 879 (21): 2005–2009. doi :10.1016/j.jchromb.2011.05.026. PMID  21665555.

Literatura

Enlaces externos