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Reactivo de Ellman

El reactivo de Ellman (ácido 5,5′-ditiobis-(2-nitrobenzoico) o DTNB ) es un químico colorógeno utilizado para cuantificar el número o la concentración de grupos tiol en una muestra. [3] Fue desarrollado por George L. Ellman.

Preparación

En el artículo original de Ellman, [3] preparó este reactivo oxidando 2-nitro-5-clorobenzaldehído al ácido carboxílico, introduciendo el tiol a través del sulfuro de sodio y acoplando el monómero mediante oxidación con yodo . Hoy en día, este reactivo está disponible comercialmente.

Prueba de Ellman

Los tioles reaccionan con este compuesto, rompiendo el enlace disulfuro para formar 2-nitro-5-tiobenzoato (TNB − ), que se ioniza en el dianión TNB 2− en agua a pH neutro y alcalino. Este ion TNB 2− tiene un color amarillo.

Reacción de DTNB con un tiol (R-SH).

Esta reacción es rápida y estequiométrica, y la adición de un mol de tiol libera un mol de TNB. El TNB 2− se cuantifica en un espectrofotómetro midiendo la absorbancia de la luz visible a 412 nm, utilizando un coeficiente de extinción de 14 150  M −1  cm −1 para soluciones tampón diluidas, [4] [5] y un coeficiente de 13 700 M −1  cm −1 para altas concentraciones de sal, como clorhidrato de guanidinio 6 M o urea 8 M. [5] La publicación original de Ellman de 1959 estimó la extinción molar en 13 600 M −1  cm −1 , y este valor se puede encontrar en algunas aplicaciones modernas del método a pesar de las determinaciones mejoradas. [6] El DTNB comercial puede no ser completamente puro, por lo que puede requerir recristalización para obtener resultados completamente precisos y reproducibles. [5]

El reactivo de Ellman se puede utilizar para medir tioles de baja masa molecular, como el glutatión, tanto en soluciones puras como en muestras biológicas, como la sangre. [7] También puede medir la cantidad de grupos tiol en las proteínas. [7]

Referencias

  1. ^ 5,5′-Ditiobis(ácido 2-nitrobenzoico) en Sigma-Aldrich
  2. ^ "Ácido 5,5'-ditiobis(2-nitrobenzoico)". pubchem.ncbi.nlm.nih.gov . Consultado el 13 de diciembre de 2021 .
  3. ^ ab Ellman GL (1959). "Grupos sulfhidrilo tisulares". Arch. Biochem. Biophys . 82 (1): 70–7. doi :10.1016/0003-9861(59)90090-6. PMID  13650640.
  4. ^ Collier HB (1973). "Carta: Una nota sobre la absortividad molar del reactivo de Ellman reducido, 3-carboxilato-4-nitrotiofenolato". Anal. Biochem . 56 (1): 310–1. doi :10.1016/0003-2697(73)90196-6. PMID  4764694.
  5. ^ abc Riddles PW, Blakeley RL, Zerner B (1983). "Reevaluación del reactivo de Ellman". Estructura de la enzima, parte I. Métodos en enzimología. Vol. 91. págs. 49-60. doi :10.1016/S0076-6879(83)91010-8. ISBN 978-0-12-181991-0. Número de identificación personal  6855597.
  6. ^ Riener CK, Kada G, Gruber HJ (2002). "Medición rápida de sulfhidrilos de proteínas con el reactivo de Ellman y con 4,4'-ditiodipiridina". Anal Bioanal Chem . 373 (4–5): 266–76. doi :10.1007/s00216-002-1347-2. PMID  12110978. S2CID  30366479.
  7. ^ ab Riener, Christian K.; Kada, Gerald; Gruber, Hermann J. (1 de julio de 2002). "Medición rápida de sulfhidrilos de proteínas con el reactivo de Ellman y con 4,4′-ditiodipiridina". Química analítica y bioanalítica . 373 (4–5): 266–276. doi :10.1007/s00216-002-1347-2. ISSN  1618-2642. PMID  12110978. S2CID  30366479.

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