La prueba de micronúcleos es una prueba que se utiliza en la detección toxicológica de compuestos genotóxicos potenciales . Actualmente, este ensayo se reconoce como uno de los más exitosos y confiables para la detección de carcinógenos genotóxicos , es decir, carcinógenos que actúan causando daño genético, y está recomendado por las directrices de la OCDE para la prueba de sustancias químicas. [1] Existen dos versiones principales de esta prueba, una in vivo y otra in vitro .
La prueba in vivo normalmente utiliza médula ósea de ratón o sangre periférica de ratón. Cuando un eritroblasto de médula ósea se convierte en un eritrocito policromático , el núcleo principal se extruye; cualquier micronúcleo que se haya formado puede permanecer en el citoplasma, que de otro modo estaría anucleado . La visualización de micronúcleos se facilita en estas células porque carecen de un núcleo principal. Un aumento en la frecuencia de eritrocitos policromáticos micronucleados en animales tratados es una indicación de daño cromosómico inducido . [2]
Los micronúcleos fueron utilizados por primera vez para cuantificar el daño cromosómico por HJ Evans et al., en las puntas de las raíces de la haba , Vicia faba . Posteriormente, el ensayo in vivo fue desarrollado de forma independiente por W. Schmid y por JA Heddle y sus colegas. El ensayo de sangre periférica de ratón fue desarrollado por JT MacGregor y ahora ha sido adaptado para la medición por citometría de flujo por A. Tometsko y colegas. El primer uso de micronúcleos en células cultivadas fue por JA Heddle y colegas en linfocitos humanos . El ensayo ha sido mejorado por M. Fenech y colegas para su uso en linfocitos y otras células en células de cultivo .
La tinción simple de Giemsa se utilizó originalmente para la puntuación de MN. Más tarde, se estableció el método de micronúcleo de bloqueo de citocinesis (CBMN), donde se utilizó Cyt-B , un inhibidor del ensamblaje del huso, para evitar que se produjera la citocinesis después de la división nuclear. El método CBMN se utiliza para la evaluación de la pérdida cromosómica, la rotura y la apoptosis y necrosis asociadas inducidas por diferentes mutágenos . [3]
Un micronúcleo es el núcleo errático (tercer) que se forma durante la anafase de la mitosis o meiosis . Los micronúcleos (el nombre significa 'núcleo pequeño') son cuerpos citoplasmáticos que tienen una porción de cromosoma acéntrico o un cromosoma completo que no fue transportado a los polos opuestos durante la anafase. Su formación da como resultado que la célula hija carezca de una parte o de la totalidad de un cromosoma. Estos fragmentos de cromosomas o cromosomas completos normalmente desarrollan membranas nucleares y forman micronúcleos como un tercer núcleo. Después de la citocinesis, una célula hija termina con un núcleo y la otra termina con un núcleo grande y uno pequeño, es decir, micronúcleos. Existe la posibilidad de que se forme más de un micronúcleo cuando se ha producido más daño genético. La prueba de micronúcleos se utiliza como una herramienta para la evaluación de la genotoxicidad de varias sustancias químicas. Es más fácil de realizar que la prueba de aberración cromosómica en términos de procedimientos y evaluación. Utilizando hibridación in situ fluorescente (FISH) con sondas dirigidas a la región del centrómero , se puede determinar si se ha perdido un cromosoma completo o sólo un fragmento.