La prueba de Kleihauer-Betke ("KB") , tinción de Kleihauer-Betke ("KB") , prueba de Kleihauer o prueba de elución ácida es un análisis de sangre que se utiliza para medir la cantidad de hemoglobina fetal transferida de un feto al torrente sanguíneo de una madre . [1] Por lo general, se realiza en madres Rh negativas para determinar la dosis necesaria de inmunoglobulina Rho(D) (RhIg) para inhibir la formación de anticuerpos Rh en la madre y prevenir la enfermedad Rh en futuros hijos Rh positivos. [2] Recibe su nombre en honor a Enno Kleihauer y Klaus Betke, quienes lo describieron en 1957.
La prueba KB es el método estándar para cuantificar la hemorragia materno-fetal (HMF). Aprovecha la resistencia diferencial de la hemoglobina fetal al ácido. Se prepara un frotis de sangre estándar a partir de la sangre de la madre y se expone a un baño de ácido. Esto elimina la hemoglobina adulta , pero no la hemoglobina fetal, de los glóbulos rojos. La tinción posterior, utilizando el método de Shepard, [3] hace que las células fetales (que contienen hemoglobina fetal) aparezcan de color rosa, mientras que los glóbulos rojos adultos solo se ven como "fantasmas". Se cuentan 2000 células bajo el microscopio y se calcula un porcentaje de células fetales con respecto a las maternas. [2]
En aquellas mujeres con pruebas positivas, se deben realizar pruebas de seguimiento en un control posparto para descartar la posibilidad de un falso positivo . Esto podría deberse a una hemoglobinopatía en la madre que causa una elevación persistente de la hemoglobina fetal, por ejemplo, el rasgo de células falciformes . [2]
La comparación con otros métodos más costosos o tecnológicamente avanzados, como la citometría de flujo , ha demostrado que la tinción KB, al igual que los métodos más avanzados, es sensible en la detección de FMH. [1] Sin embargo, las publicaciones han demostrado que, en comparación con los métodos de citometría de flujo, la prueba KB sobreestima la FMH debido a los resultados falsos positivos cuando hay células F en la muestra de sangre materna. Los errores de recuento de fondo pueden dar lugar a estimaciones de hasta 5 ml de pérdida de sangre fetal cuando en realidad no hay tal pérdida de sangre, pero los métodos estándar disponibles en la mayoría de los laboratorios admiten una probabilidad extremadamente baja de retorno de un falso positivo cuando se ha producido una FMH más grave. [2]
Se preparan frotis finos a partir de sangre capilar o sangre venosa recolectada en anticoagulantes como heparina , oxalato , citrato o EDTA . Los frotis se secan al aire entre 10 y 60 minutos, se fijan en etanol al 80% en volumen durante 5 minutos a 20-22 °C, se enjuagan con agua del grifo y se secan al aire. Luego, las películas se sumergen en el tampón de citrato-fosfato durante 5 minutos a 37 °C y se agitan suavemente durante aproximadamente 3 minutos. Los portaobjetos se enjuagan con agua del grifo, se secan y se tiñen con hematoxilina ácida de Ehrlich durante 3 minutos, se enjuagan con agua y se secan nuevamente. Se contratiñen con eritrosina durante 3 minutos. Después de un enjuague final, las películas se secan y se examinan con microscopio óptico. [4]
Las células de hemoglobina F se tiñen densamente con eritrosina, las células de hemoglobina A aparecen como células fantasma, mientras que las células intermedias se tiñen más o menos de rosa. Los reticulocitos que contienen hemoglobina A pueden aparecer como células intermedias y/o pueden mostrar granulación intracelular. Los cuerpos de inclusión (cuerpos de Heinz, cadenas α o β precipitadas) son visibles en las células eluidas como inclusiones compactas de diferente tamaño. La hemoglobina A se eluye independientemente de si es oxihemoglobina, metahemoglobina, cianometahemoglobina, hemoglobina reducida o carboxihemoglobina.
Se recomiendan los métodos desarrollados por Schneider y Ludwig [5] y Bartsch. Para la determinación de la distribución intracelular de la hemoglobina F, se puede emplear el método semicuantitativo de Shepard, Weatherall y Conley.
Los valores normales de las células de hemoglobina F en adultos publicados originalmente por Kleihauer fueron inferiores al 0,01%; en los recién nacidos a término son superiores al 90%.
Para determinar si una prueba positiva de FMH indica la causa probable de muerte fetal, se debe calcular el porcentaje del volumen sanguíneo fetal total perdido, haciendo los ajustes apropiados en función de las siguientes relaciones conocidas:
Estas restricciones se pueden aplicar luego para obtener la fórmula
dónde
Una estimación del número necesario de viales de inmunoglobulina Rho(D) puede asumir las siguientes ecuaciones: [6]
Combinando estas dos ecuaciones obtenemos: [6]
Esto es aproximadamente igual a:
En la práctica, si el número a la derecha del punto decimal es ≥5, se redondea hacia arriba para agregar un vial. [6]
Supongamos que se realiza una tinción de KB y se observan los glóbulos rojos totales, de los cuales se encuentran glóbulos rojos fetales. Supongamos además que el peso del feto al nacer muerto en cuestión es . Entonces concluiríamos que el porcentaje total de sangre fetal perdida es aproximadamente:
hasta cinco dígitos significativos . Por lo tanto, concluiríamos que el feto en consideración perdió el 66,667% (dos tercios) de su sangre a través de FMH. En general, la muerte fetal es muy probable para cualquier valor de , en particular si el feto pierde abruptamente esta cantidad de sangre; en este ejemplo, sería probable que sospechemos que la FMH es la causa de la muerte fetal. Sin embargo, es importante señalar que dicho diagnóstico aún no es completamente concluyente; los fetos que pierden grandes cantidades de sangre durante largos períodos de tiempo pueden compensar esta pérdida de sangre más lenta; ya que la tinción KB no nos dice nada con respecto al nivel de agudeza de la FMH. Esto significa que no es posible correlacionar por completo una tinción KB positiva y alta con una muerte fetal, aunque en muchos casos, dada otra información, como complicaciones hereditarias conocidas del embarazo, se han observado coeficientes de correlación positivos extremadamente altos entre FMH y muerte fetal. [ cita requerida ]
Dado que las células sanguíneas fetales y maternas tienen la misma expectativa de vida en el torrente sanguíneo materno, es posible obtener resultados informativos de una tinción de KB durante un período considerable de tiempo después de un parto de feto muerto. Sin embargo, si la madre y el feto son incompatibles ABO , es más crucial realizar rápidamente la tinción de KB después de un parto de feto muerto, ya que los glóbulos rojos fetales se eliminarán del torrente sanguíneo materno rápidamente, lo que hará que la tinción de KB subestime el grado de FMH, si lo hay. En la literatura se ha expresado mucha preocupación con respecto a los falsos positivos cuando se toman muestras después del parto. En general, esto no es un problema. El parto da como resultado una mayor frecuencia de detección de microhemorragias, pero esto no debe confundir la interpretación de FMH como una posible causa de parto de feto muerto. No es necesario extraer la muestra antes de la inducción, el inicio del parto, el parto, la expulsión de la placenta, etc., a pesar de lo que afirman algunas publicaciones. Sin embargo, si se va a utilizar una cesárea, no extraer la muestra antes de eso dará como resultado una tasa de falsos positivos del 2%. [ cita requerida ]
Por último, cualquier cosa que provoque la persistencia de la hemoglobina fetal en las células sanguíneas maternas hará que la interpretación sea mucho más complicada. Ciertas hemoglobinopatías , la más común de las cuales es el rasgo drepanocítico, provocan esto. En general, en alrededor del 1-3% de los casos esto podría dar lugar a una interpretación errónea.
Un artículo publicado en 2004 concluyó que la prueba de Kleihauer-Betke (KB) es necesaria en todos los casos de traumatismo materno, ya que la evaluación clínica no es lo suficientemente sensible para determinar el riesgo de parto prematuro. La prueba predice con precisión el riesgo de parto prematuro después de un traumatismo materno, mientras que el artículo concluyó que la evaluación clínica no lo hace. Con una prueba de Kleihauer-Betke negativa, la duración de la monitorización fetal electrónica postraumática puede limitarse de forma segura. Con una prueba de Kleihauer-Betke positiva, el riesgo significativo de parto prematuro exige una monitorización detallada. La prueba de Kleihauer-Betke tiene ventajas importantes para todas las víctimas de traumatismo materno, independientemente del estado Rh. [7]
{{cite book}}: |website=ignorado ( ayuda ) Última actualización: Última actualización: 20 de enero de 2020.