La prueba de desnaturalización alcalina , también conocida como prueba A o Apt , es una prueba médica que se utiliza para diferenciar la sangre fetal o neonatal de la sangre materna que se encuentra en las heces o el vómito de un recién nacido, o de la sangre vaginal materna. [1] [2]
La prueba fue desarrollada por Leonard Apt (1922-2013), [3] un oftalmólogo pediátrico estadounidense. La prueba se utilizó originalmente para identificar el origen de las heces con sangre en los recién nacidos. Se ha modificado para distinguir la hemoglobina fetal de la materna en muestras de sangre de cualquier fuente. [4]
La prueba se basa en las diferencias entre la hemoglobina materna y fetal . La sangre materna contiene hemoglobina adulta compuesta de dos subunidades alfa y dos beta (también conocida como hemoglobina A o HbA; es decir, hemoglobina adulta normal). La sangre fetal contiene hemoglobina fetal compuesta de dos subunidades alfa y dos gamma (también conocida como hemoglobina F o HbF; es decir, hemoglobina fetal normal). Esta diferencia en la composición otorga a los diferentes tipos de hemoglobina diferentes propiedades químicas (además de la mayor afinidad que tiene la HbF por el oxígeno disuelto en la sangre que la HbA, lo que permite al bebé extraer oxígeno de la sangre de la madre). La hemoglobina fetal es resistente a la desnaturalización alcalina (básica), mientras que la hemoglobina adulta es susceptible a dicha desnaturalización. Por lo tanto, exponer la muestra de sangre al hidróxido de sodio ( NaOH ) desnaturalizará la hemoglobina del adulto pero no la del feto. La hemoglobina fetal aparecerá de un color rosado bajo el microscopio, mientras que la hemoglobina adulta aparecerá de un color amarillo parduzco.
La sangre se mezcla con una pequeña cantidad de agua esterilizada para provocar la hemólisis de los glóbulos rojos , produciendo hemoglobina libre . A continuación se centrifuga la muestra durante varios minutos. Luego, el sobrenadante rosa que contiene hemoglobina se mezcla con 1 ml de NaOH al 1% por cada 5 ml de sobrenadante. El color del líquido se evalúa después de 2 minutos. La hemoglobina fetal permanecerá rosada y la hemoglobina adulta se volverá marrón amarillenta, ya que la hemoglobina adulta es menos estable y se convertirá en hematina , que tiene un ligando hidróxido. [5]