La nefelometría es una técnica utilizada en inmunología para determinar los niveles de varias proteínas del plasma sanguíneo. Por ejemplo, los niveles totales de isotipos o clases de anticuerpos : inmunoglobulina M , inmunoglobulina G e inmunoglobulina A. [1] Es importante en la cuantificación de cadenas ligeras libres en enfermedades como el mieloma múltiple . La cuantificación es importante para la clasificación de la enfermedad y para su seguimiento una vez que un paciente ha sido tratado (una mayor desviación de la relación entre las cadenas ligeras kappa y lambda después de que un paciente ha sido tratado es una indicación de recurrencia de la enfermedad).
Se realiza midiendo la luz dispersada en un ángulo de la muestra que se está midiendo. [2] En la nefelometría diagnóstica, la rama ascendente de la curva de Heidelberger-Kendall se extiende optimizando el curso de la reacción de modo que las señales de medición de la mayoría de las proteínas plasmáticas (de la sangre humana) caigan en el lado izquierdo de la curva de Heidelberger-Kendall. incluso en concentraciones muy altas. [ cita necesaria ]
Esta técnica se utiliza ampliamente en laboratorios clínicos porque se automatiza con relativa facilidad. Se basa en el principio de que una suspensión diluida de partículas pequeñas dispersará la luz (normalmente un láser) que la atraviesa en lugar de simplemente absorberla. La cantidad de dispersión se determina recogiendo la luz en un ángulo (normalmente de 30 y 90 grados). [3]
El anticuerpo y el antígeno se mezclan en concentraciones tales que sólo se forman pequeños agregados que no se depositan rápidamente en el fondo. La cantidad de dispersión de la luz se mide y se compara con la cantidad de dispersión de mezclas conocidas. La cantidad de incógnita se determina a partir de una curva estándar.
La nefelometría se puede utilizar para detectar antígenos o anticuerpos, pero generalmente se realiza con el anticuerpo como reactivo y el antígeno del paciente como desconocido. [4] En el Laboratorio Médico de Inmunología se pueden realizar dos tipos de pruebas: "nefelometría de punto final" y "nefelometría cinética (velocidad)".
Las pruebas de nefelometría de punto final se ejecutan permitiendo que la reacción anticuerpo/antígeno se complete hasta su finalización (hasta que todos los anticuerpos reactivos presentes y los antígenos de la muestra del paciente presente que pueden agregarse lo hayan hecho y no se puedan formar más complejos). Sin embargo, las partículas grandes se caerán de la solución y provocarán una lectura de dispersión falsa, por lo que se ideó la nefelometría cinética.
En la nefelometría cinética, la tasa de dispersión se mide inmediatamente después de agregar el reactivo. Mientras el reactivo sea constante, se puede considerar que la tasa de cambio está directamente relacionada con la cantidad de antígeno presente.
Aparte de las aplicaciones médicas, la nefelometría se puede utilizar para medir la claridad del agua, [5] para medir el crecimiento de microorganismos [6] [7] y para probar la solubilidad de fármacos. [3]