La separación inmunomagnética ( IMS ) es una herramienta de laboratorio que puede aislar eficazmente células de fluidos corporales o células cultivadas . También se puede utilizar como método para cuantificar la patogenicidad de alimentos, sangre o heces. Los análisis de ADN han apoyado el uso combinado tanto de esta técnica como de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). [1] Otra herramienta de separación de laboratorio es la separación magnética por afinidad (AMS), que es más adecuada para el aislamiento de células procarióticas . [2]
IMS se ocupa del aislamiento de células, proteínas y ácidos nucleicos mediante la captura específica de biomoléculas mediante la unión de pequeñas partículas magnetizadas, perlas, que contienen anticuerpos y lectinas . [3] Estas perlas están recubiertas para unirse a biomoléculas específicas, se separan suavemente y pasan por múltiples ciclos de lavado para obtener moléculas específicas unidas a estas perlas súper paramagnéticas , que pueden diferenciarse según la fuerza del campo magnético y las moléculas objetivo, luego se eluyen para recogen el sobrenadante y luego pueden determinar la concentración de biomoléculas específicas. IMS obtiene ciertas concentraciones de moléculas específicas dentro de las bacterias objetivo.
Se colocará una mezcla de población celular en un campo magnético donde las células luego se unirán a perlas súper paramagnéticas, un ejemplo específico son las Dynabeads (4,5 μm), que permanecerán una vez que se elimine el exceso de sustrato y se unirán al antígeno objetivo. Dynabeads consta de núcleos que contienen hierro, que están cubiertos por una fina capa de una cubierta de polímero que permite la absorción de biomoléculas. Las perlas están recubiertas con anticuerpos primarios, anticuerpos específicos, lectinas, enzimas o estreptavidina; [3] el enlace entre los materiales recubiertos con perlas magnetizadas es la separación de las células del conector de ADN escindible de las perlas cuando el cultivo de células es más deseable. [4]
Muchas de estas cuentas tienen los mismos principios de separación; sin embargo, la presencia y diferentes intensidades de los campos magnéticos requieren ciertos tamaños de perlas, según las ramificaciones de la separación de la población celular. Las perlas de mayor tamaño (>2 μm) son el rango más utilizado producido por Dynal (Dynal [UK] Ltd., Wirral, Mersyside, Reino Unido; Dynal, Inc., Lake Success, NY). Mientras que las perlas más pequeñas (<100 nm) se utilizan principalmente para el sistema MACS producido por Miltenyi Biotech (Miltenyi Biotech Ltd., Bisley, Surrey, Reino Unido; Miltenyi Biotech Inc., Auburn, CA). [3]
La separación inmunomagnética se utiliza en diversos campos científicos, incluidos la biología molecular, la microbiología y la inmunología. (3) Esta técnica de separación no consiste únicamente en la separación de células dentro de la sangre, sino que también puede usarse para técnicas de separación de tumores primarios y en la investigación de metástasis , mediante la separación en partes componentes, creando un retraso de células singulares, luego permitiendo que el anticuerpo adecuado marque la célula. En la investigación de metástasis, esta técnica de separación puede resultar necesaria para separar cuando se proporciona una población de células y se desea aislar células tumorales en tumores, sangre periférica y médula ósea . [5]
Los anticuerpos que recubren perlas paramagnéticas se unirán a los antígenos presentes en la superficie de las células, capturando así las células y facilitando la concentración de estas células adheridas a las perlas. El proceso de concentración se crea mediante un imán colocado en el costado del tubo de ensayo que atrae las perlas. Sistemas MACS (sistema de separación magnética de células): [6] [3]
Mediante el uso de perlas súper paramagnéticas más pequeñas (<100 nm), que requieren un campo magnético más fuerte para separar las células. Las células se marcan con anticuerpos primarios y luego las perlas MACS se recubren con anticuerpos específicos. Luego, esta suspensión de células marcadas se coloca en una columna de separación en un fuerte campo magnético. Las células marcadas están contenidas, magnetizadas, mientras que en el campo magnético y las células no marcadas están suspendidas, no magnetizadas, para ser recolectadas. Una vez retiradas del campo magnético, las células positivas se eluyen. Luego, las células incorporan estas perlas MACS, lo que les permite permanecer en la columna porque no interfieren con la unión celular a la superficie del cultivo en las interacciones entre células. Luego se aplica un reactivo de eliminación de perlas para liberar enzimáticamente las perlas MACS, lo que permite que esas células se vuelvan a marcar con algún otro marcador, que luego se clasifica.