La microscopía de interferencia clásica , también llamada microscopía de interferencia cuantitativa , utiliza dos haces de luz separados con una separación lateral mucho mayor que la utilizada en la microscopía de contraste de fase o en la microscopía de interferencia diferencial (DIC).
En las variantes del microscopio de interferencia en las que el objeto y el haz de referencia pasan por el mismo objetivo, se producen dos imágenes de cada objeto (una de ellas es la "imagen fantasma"). Las dos imágenes están separadas lateralmente dentro del campo visual o en diferentes planos focales, según lo determinen los principios ópticos empleados. Estas dos imágenes pueden resultar molestas cuando se superponen, ya que pueden afectar gravemente a la precisión de las mediciones de espesor de masa. Por lo tanto, puede ser necesaria la rotación de la preparación, como en el caso de la CID.
Uno de los primeros microscopios de interferencia utilizables fue diseñado por Dyson [1] y fabricado por Cooke, Troughton & Simms (posteriormente Vickers Instruments), York, Inglaterra. Este ingenioso sistema óptico logró obtener imágenes de interferencia sin necesidad de elementos polarizadores en la trayectoria del haz.
Un diseño popular posterior que involucraba elementos polarizadores fue diseñado por Smith [2] [3] y comercializado primero por C. Baker, en Londres, y posteriormente por la American Optical Company en los EE. UU.
El problema de la doble imagen que se presenta con frecuencia en todos los diseños mencionados anteriormente se evitó por completo en el diseño del interferómetro Mach-Zehnder implementado por Horn, un instrumento muy costoso que no emplea luz polarizada, pero que requiere objetivos y condensadores duplicados que coincidan con precisión. Con este diseño (comercializado por E. Leitz) se logró una separación de haz de 60 mm en microscopía, pero aquí surgió la nueva dificultad de equilibrar los espesores ópticos de dos preparaciones de portaobjetos de microscopio separadas (muestra y maniquí) y mantener este equilibrio crítico durante observaciones más prolongadas (por ejemplo, estudios con lapso de tiempo de células vivas mantenidas a 37 °C), ya que de lo contrario se produce un cambio gradual en el color de interferencia de fondo con el tiempo.
La principal ventaja que ofrecen las mediciones de microscopía de interferencia es la posibilidad de medir la masa seca proyectada de células vivas, que fue explotada de manera efectiva por primera vez por Andrew Huxley en estudios de la estructura y función de las células musculares estriadas, lo que condujo al modelo de filamento deslizante de la contracción muscular. [4]
La popularidad de la microscopía de interferencia alcanzó su punto máximo alrededor de los años 1940-1970 y luego cayó debido a la complejidad del instrumento y las dificultades tanto en su uso como en la interpretación de los datos de imagen. En los últimos años, el microscopio de interferencia clásico (en particular el instrumento Mach-Zehnder) ha sido "redescubierto" por los biólogos porque su principal desventaja original (la interpretación difícil de las bandas de interferencia trasladadas o imágenes coloreadas complejas) ahora se puede superar fácilmente mediante la grabación de imágenes con cámara digital, seguida de la aplicación de algoritmos informáticos que entregan rápidamente los datos procesados como imágenes en falso color de la masa seca proyectada. [5] [6] [7] La microscopía de interferencia para la inspección industrial, la inspección de semiconductores y el análisis de la estructura de la superficie está muy desarrollada y su uso está muy extendido. [8]