La isotacoforesis ( ITP ) es una técnica de química analítica que se utiliza para la separación y concentración selectiva de analitos iónicos . Es una forma de electroforesis ; los analitos cargados se separan en función de la movilidad iónica , una cantidad que indica la velocidad a la que un ion migra a través de un campo eléctrico .
En las separaciones convencionales de ITP, se utiliza un sistema de tampón discontinuo. La muestra se introduce entre una zona de electrolito principal rápido (LE) y una zona de electrolito terminal lento (o: final) (TE). Por lo general, el LE y el TE tienen un contraión común , pero los co-iones (que tienen cargas con el mismo signo que los analitos de interés) son diferentes: el LE se define por co-iones con alta movilidad iónica , mientras que el TE se define por co-iones con baja movilidad iónica. Los analitos de interés tienen una movilidad iónica intermedia. La aplicación de un potencial eléctrico da como resultado un campo eléctrico bajo en el electrolito principal y un campo eléctrico alto en el electrolito terminal. Los iones de analito situados en la zona TE migrarán más rápido que los co-iones TE circundantes, mientras que los iones de analito situados en el LE migrarán más lentamente; el resultado es que los analitos se concentran en la interfaz LE/TE.
El ITP es un método de desplazamiento: los iones de un tipo determinado que se enfocan desplazan a otros iones. Si están presentes en cantidades suficientes, los iones de analito que se enfocan pueden desplazar a todos los coiones del electrolito, alcanzando una concentración de meseta . Múltiples analitos con movilidades iónicas suficientemente diferentes formarán múltiples zonas de meseta. De hecho, las separaciones ITP en modo meseta se reconocen fácilmente por perfiles en forma de escalera, donde cada meseta de la escalera representa una zona de electrolito o analito que tiene (de LE a TE) campos eléctricos crecientes y conductividades decrecientes. En el ITP en modo pico, las cantidades de analitos son insuficientes para alcanzar concentraciones de meseta, dichos analitos se concentrarán en picos agudos de tipo gaussiano . En el ITP en modo pico, los picos de analito se superpondrán fuertemente, a menos que se agreguen los llamados compuestos espaciadores con movilidades iónicas intermedias entre las de los analitos; dichos compuestos espaciadores pueden segregar zonas de analito adyacentes. [1]
Una separación ITP completa se caracteriza por un equilibrio dinámico en el que todas las zonas coiónicas migran con velocidades iguales. De este fenómeno, la ITP obtiene su nombre: iso = igual, tachos = velocidad, phoresis = migración.
La isotacoforesis es exactamente igual al paso de apilamiento en estado estable en la electroforesis discontinua . [2]
Una forma popular de ITP es la ITP transitoria (tITP). Alivia la limitación de la ITP convencional de que tiene una capacidad de separación limitada debido a la superposición de la zona de analito. En la ITP transitoria, los analitos se concentran primero por ITP y luego se pueden separar en la línea base mediante electroforesis de zona . La ITP transitoria generalmente se logra disolviendo la muestra en la TE y colocando el tapón de muestra/TE entre las zonas de LE, o viceversa: un tapón de muestra/LE también se puede colocar entre las zonas de TE. En el primer caso, los analitos se concentran en la interfaz delantera TE/LE. Mientras tanto, la parte posterior del tapón de TE se disuelve en la LE porque los iones LE más rápidos superan a los iones TE. Cuando todos los iones TE se disuelven, el proceso de enfoque cesa y los analitos se separan de acuerdo con los principios de la electroforesis de zona.
Hoy en día, la tITP está más extendida que la ITP convencional porque se implementa fácilmente en separaciones por electroforesis capilar (CE) como un paso de preconcentración, lo que hace que la CE sea más sensible y al mismo tiempo se beneficie de sus potentes capacidades de separación.