stringtranslate.com

Inmunodifusión doble de Ouchterlony

Imagen de una placa de inmunodifusión doble de Ouchterlony, después de que se haya realizado la inmunodifusión. En ella, se cuantifica el valor del título de un antígeno. El pocillo central contiene un anticuerpo y los pocillos circundantes tienen una concentración decreciente del antígeno correspondiente.
Patrones de Ouchterlony que no muestran identidad entre los puntos superiores
Patrones de Ouchterlony que muestran una identidad completa entre los puntos superiores
Patrones de Ouchterlony que muestran identidad parcial entre los puntos superiores

La inmunodifusión doble de Ouchterlony (también conocida como inmunodifusión doble pasiva ) es una técnica inmunológica utilizada en la detección, identificación y cuantificación de anticuerpos y antígenos , como inmunoglobulinas y antígenos nucleares extraíbles . La técnica recibe su nombre de Örjan Ouchterlony , el médico sueco que desarrolló la prueba en 1948 para evaluar la producción de toxinas de difteria a partir de bacterias aisladas. [1]

Procedimiento

Se corta una placa de gel para formar una serie de agujeros ("pocillos") en un gel de agar o agarosa . Se coloca un extracto de muestra de interés (por ejemplo, células humanas extraídas de tejido de amígdalas) en un pocillo, se colocan sueros o anticuerpos purificados en otro pocillo y se deja que la placa se desarrolle durante 48 horas. Durante este tiempo, los antígenos del extracto de muestra y los anticuerpos se difunden fuera de sus respectivos pocillos. Donde se encuentran los dos frentes de difusión, si alguno de los anticuerpos reconoce alguno de los antígenos, se unirán a los antígenos y formarán un complejo inmunológico . El complejo inmunológico precipita en el gel para dar una línea blanca delgada (línea de precipitina), que es una firma visual del reconocimiento del antígeno. [ cita requerida ] [2] [3]

El método se puede llevar a cabo en paralelo con múltiples pocillos llenos de diferentes mezclas de antígenos y múltiples pocillos con diferentes anticuerpos o mezclas de anticuerpos, y la reactividad antígeno-anticuerpo se puede ver observando entre qué pocillos se observa el precipitado. Cuando se utiliza más de un pocillo, hay muchos resultados posibles en función de la reactividad del antígeno y el anticuerpo seleccionados. La zona de líneas de equivalencia puede dar una identidad completa (es decir, una línea continua), una identidad parcial (es decir, una línea continua con un espolón en un extremo) o una falta de identidad (es decir, las dos líneas se cruzan completamente). [ cita requerida ]

La sensibilidad del ensayo se puede aumentar utilizando un colorante como el azul brillante de Coomassie , esto se hace mediante la tinción y decoloración repetidas del ensayo hasta que las líneas de precipitina tengan máxima visibilidad. [1]

Teoría

La precipitación ocurre con la mayoría de los antígenos porque el antígeno es multivalente (es decir, tiene varios determinantes antigénicos por molécula a los que los anticuerpos pueden unirse). Los anticuerpos tienen al menos dos sitios de unión al antígeno (y en el caso de la inmunoglobulina M hay un complejo multimérico con hasta 10 sitios de unión al antígeno), por lo que se forman grandes agregados o redes gelatinosas de antígeno y anticuerpo. Experimentalmente, se agrega una cantidad creciente de antígeno a una cantidad constante de anticuerpo en solución. Inicialmente, a baja concentración de antígeno, todo el anticuerpo está contenido en el precipitado. Esto se llama zona de exceso de anticuerpo (es decir, fenómeno de prozona). A medida que se agrega más antígeno, la cantidad de proteína precipitada aumenta hasta que las moléculas de antígeno/anticuerpo están en una proporción óptima. Esto se conoce como zona de equivalencia o punto de equivalencia. Cuando la cantidad de antígeno en solución excede la cantidad de anticuerpo, la cantidad de precipitación disminuirá. Esto se conoce como zona de exceso de antígeno.

Referencias

  1. ^ ab Hornbeck, Peter (febrero de 2017). "Ensayo de doble inmunodifusión para detectar anticuerpos específicos (Ouchterlony)". Protocolos actuales en inmunología . 116 (1): 2.3.1–2.3.4. doi :10.1002/cpim.18. PMID  28150863. S2CID  35908711.
  2. ^ Moticka, Edward J. (2015). Una perspectiva histórica sobre la inmunología basada en evidencias. Elsevier. pág. 360. ISBN 978-0-12-398381-7.
  3. ^ Paul, William E., ed. (2008). "Inmunodifusión y el método de Ouchterlony". Inmunología fundamental (6.ª ed.). Lippincott Williams & Wilkins. págs. 176-177. ISBN 9780781765190.pág. 176 pág. 177

Enlaces externos