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Centrifugación analítica en banda

Figura que compara una serie temporal idealizada de experimentos de ultracentrifugación de banda y ultracentrifugación de límite.

La centrifugación analítica en banda (ABC) (también conocida como ultracentrifugación analítica en banda o velocidad de sedimentación en banda) es un procedimiento de ultracentrifugación especializado , en el que, a diferencia del uso típico de la ultracentrifugación analítica de velocidad de sedimentación (límite) (SV-AUC), en la que se centrifuga una solución homogénea a granel, en la ABC se coloca una muestra fina (~15 μL, ~500 μm) [1] sobre un disolvente a granel y luego se centrifuga. El método se distingue de la sedimentación por zonas en que se autogenera un gradiente de densidad estabilizador durante la centrifugación, mediante el uso de un "disolvente binario" a granel de mayor densidad (que la muestra), que contiene tanto un disolvente (es decir, H 2 O) como un segundo componente (moléculas pequeñas, es decir, CsCl ) que sedimentarán para formar un gradiente de densidad estabilizador para la muestra. [2]

El ABC también requiere celdas de ultracentrífuga analíticas especialmente diseñadas, ya que la muestra no se aplica manualmente con una pipeta, sino que se administra automáticamente a través de un capilar bajo fuerzas g bajas al comienzo de una serie desde un depósito dentro de la celda. Se demostró por primera vez en 1963, [2] y no se usó comúnmente durante muchas décadas, [3] [4] pero recientemente se ha vuelto más utilizado debido a su aplicabilidad a las mediciones de control de calidad en virus terapéuticos como los virus adenoasociados (AAV) . [1] Los perfiles resultantes de los análisis ABC son similares en su interpretación a los perfiles de las separaciones electroforéticas ("electroferogramas") y, por lo tanto, se los ha denominado "centrifugogramas". [1]

Véase también

Referencias

  1. ^ abc Khasa, Harshit; Kilby, Greg; Chen, Xiaoyu; Wang, Chunlei (2021). "Centrifugación analítica en banda para la separación y cuantificación de partículas de AAV vacías y llenas". Terapia molecular: métodos y desarrollo clínico . 21 . Elsevier BV: 585–591. doi :10.1016/j.omtm.2021.04.008. ISSN  2329-0501. PMC  8142049 . PMID  34095342.
  2. ^ ab Vinograd, Jerome; Bruner, Robert; Kent, Rebecca; Weigle, Jean (1963). "Centrifugación en banda de macromoléculas y virus en gradientes de densidad autogenerados". Actas de la Academia Nacional de Ciencias . 49 (6): 902–910. doi : 10.1073/pnas.49.6.902 . ISSN  0027-8424. PMC 300030 . PMID  13997382. 
  3. ^ Schneider, Cornelia M.; Cölfen, Helmut (21 de junio de 2018). "Revisión de la centrifugación analítica en banda". Revista Europea de Biofísica . 47 (7). Springer Science and Business Media LLC: 799–807. doi :10.1007/s00249-018-1315-1. ISSN  0175-7571. PMID  29931388.
  4. ^ Schneider, Cornelia M.; Haffke, Dirk; Cölfen, Helmut (30 de agosto de 2018). "Experimento de sedimentación en banda en ultracentrifugación analítica revisado". Química analítica . 90 (18). Sociedad Química Estadounidense (ACS): 10659–10663. doi : 10.1021/acs.analchem.8b02768 . ISSN  0003-2700. PMID  30160111.