La acetiltransferasa de cloranfenicol (o CAT ) es una enzima bacteriana ( EC 2.3.1.28) [1] que desintoxica el antibiótico cloranfenicol y es responsable de la resistencia al cloranfenicol en las bacterias. [2] Esta enzima une covalentemente un grupo acetilo de acetil-CoA al cloranfenicol, lo que evita que el cloranfenicol se una a los ribosomas . Un residuo de histidina, ubicado en la sección C-terminal de la enzima, juega un papel central en su mecanismo catalítico.
Se ha determinado la estructura cristalina de la enzima tipo III de Escherichia coli con cloranfenicol unido. CAT es un trímero de subunidades idénticas (monómero Mr 25.000) y la estructura trimérica está estabilizada por una serie de enlaces de hidrógeno, algunos de los cuales dan lugar a la extensión de una lámina beta a través de la interfaz de la subunidad. El cloranfenicol se une en un bolsillo profundo situado en el límite entre las subunidades adyacentes del trímero, de modo que la mayoría de los residuos que forman el bolsillo de unión pertenecen a una subunidad mientras que la histidina catalíticamente esencial pertenece a la subunidad adyacente. La His195 está adecuadamente posicionada para actuar como un catalizador básico general en la reacción, y la estabilización tautomérica necesaria se proporciona mediante una interacción inusual con un oxígeno carbonílico de la cadena principal. [3]
La CAT se utiliza como un sistema indicador para medir el nivel de un promotor o su expresión específica de tejido. El ensayo CAT implica el seguimiento de la acetilación del cloranfenicol marcado radiactivamente en una placa de TLC ; la actividad de la CAT se determina buscando las formas acetiladas del cloranfenicol, que tienen una tasa de migración significativamente mayor en comparación con la forma no acetilada. [4]
