La temporada 2000-01 de la Primera División de Chipre fue la 62.ª temporada de la máxima división de fútbol de Chipre . El Omonia ganó su 18.º título.
En la temporada 2000-01 participaron catorce equipos de la Primera División de Chipre. Todos los equipos se enfrentaron entre sí dos veces, una en casa y otra fuera. El equipo con más puntos al final de la temporada se coronó campeón. Los tres últimos equipos descendieron a la Segunda División de Chipre 2001-02 .
Los campeones aseguraron su participación en la Liga de Campeones de la UEFA 2001-02 y el subcampeonato en la Copa de la UEFA 2001-02 .
Los equipos tenían que manifestar su interés en participar en la Copa Intertoto de la UEFA de 2001 antes de que finalizara el campeonato. Al final del campeonato, el equipo mejor clasificado entre los interesados participaba en la Copa Intertoto (si no había conseguido su participación en ninguna otra competición de la UEFA).
Los equipos recibieron tres puntos por una victoria, un punto por un empate y cero puntos por una derrota.
Ethnikos Assia , Anagennisi Deryneia y Alki Larnaca descendieron de la temporada anterior y jugaron en la Segunda División chipriota 2000-01 . Fueron reemplazados por los tres primeros equipos de la Segunda División chipriota 1999-2000 , Digenis Morphou , Aris Limassol y Doxa Katokopias .
Antes del inicio de la temporada, APOP Paphos y Evagoras Paphos se fusionaron formando AEP Paphos , que tomó el lugar de APOP Paphos en la Primera División chipriota.
