La 7-aminoactinomicina D ( 7-AAD ) es un compuesto químico fluorescente con una fuerte afinidad por el ADN . Se utiliza como marcador fluorescente del ADN en microscopía de fluorescencia y citometría de flujo . Se intercala en el ADN bicatenario, con una alta afinidad por las regiones ricas en GC , [2] lo que lo hace útil para estudios de bandas cromosómicas . [3]
Con un máximo de absorción a 546 nm, el 7-AAD se excita de manera eficiente utilizando un láser de helio-neón de 543 nm ; también se puede excitar con una eficiencia algo menor utilizando líneas láser de argón de 488 nm o 514 nm. Su emisión tiene un desplazamiento de Stokes muy grande con un máximo en el rojo profundo: 647 nm. Por lo tanto, el 7-AAD es compatible con la mayoría de los fluoróforos azules y verdes, e incluso con muchos fluoróforos rojos, en aplicaciones multicolor.
El 7-AAD no atraviesa fácilmente las membranas celulares intactas ; si se lo va a utilizar como colorante para obtener imágenes de fluorescencia del ADN, la membrana celular debe permeabilizarse o romperse. Este método se puede utilizar en combinación con la fijación de las muestras con formaldehído.
El 7-AAD también se utiliza como colorante de viabilidad celular . Las células con membranas dañadas se tiñen con 7-AAD, mientras que las células vivas con membranas celulares intactas permanecerán oscuras. La viabilidad de las células en la citometría de flujo debe ser de alrededor del 95% pero no menos del 90%. [4]
El compuesto relacionado, la actinomicina D, no es fluorescente, pero se une al ADN de la misma manera que el 7-AAD. Su absorbancia cambia cuando se une al ADN y se puede utilizar como colorante en la microscopía de transmisión convencional.
