Pipeteo de antiinmunoglobulinas en un panel de inmunofijación. El panel examina simultáneamente a 4 pacientes (uno en cada cuadrante). Cada paciente tiene 6 paneles de electroforesis: el de la izquierda es una electroforesis de proteínas séricas convencional . El resto recibe soluciones con inmunoglobulinas anti-IgG, anti-IgA, anti-IgM, anti-cadena ligera kappa y anti-cadena ligera lambda, respectivamente, de izquierda a derecha. Cada solución de antiinmunoglobulina está coloreada artificialmente para garantizar que coincida con el mapa de colores de la parte superior.Electroforesis de inmunofijación, representación esquemática: - A. Suero normal - B. Inmunoglobulina monoclonal intacta IgGλ - C, D. Inmunoglobulina monoclonal intacta IgDλ y cadena ligera libre λ (Fλ). Con. = Tinción por electroforesis convencional de la proteína total.
El método detecta por precipitación : cuando un antígeno soluble (Ag) se pone en contacto con el anticuerpo correspondiente , se produce una precipitación, que puede ser visible a simple vista o al microscopio. [ cita requerida ]
La inmunofijación consiste en separar los anticuerpos de una mezcla en función de su movilidad electroforética específica . Para la identificación se utilizan antisueros específicos para los anticuerpos diana. [1]
En concreto, la inmunofijación permite la detección de anticuerpos monoclonales representativos de enfermedades como el mieloma o la macroglobulinemia de Waldenström .
Técnica
La técnica consiste en depositar una muestra de suero (u orina previamente concentrada) sobre un gel. Tras la aplicación de una corriente eléctrica que permite separar las proteínas en función de su tamaño, se depositan sobre el gel anticuerpos específicos para cada tipo de inmunoglobulina . De este modo, aparecen sobre el gel bandas más o menos estrechas que corresponden a diferentes inmunoglobulinas. [ cita requerida ]
La inmunofijación, como inmunoelectroforesis, se realiza en dos pasos:
El primer paso es idéntico para ambas técnicas. Consiste en depositar las inmunoglobulinas contenidas en el suero o la orina sobre un gel y luego separar las inmunoglobulinas en función de su movilidad electroforética haciéndolas migrar bajo el efecto de un campo eléctrico. Esta migración depende de la masa y de la carga del antígeno. Una vez separadas las inmunoglobulinas, podemos pasar al siguiente paso.
El segundo paso se basa en la técnica utilizada. La inmunofijación requiere una electroforesis para migrar las proteínas séricas en la réplica. A continuación, se utilizan antisueros específicos anti-inmunoglobulina para tratar cada réplica. Para ello, los antisueros no se colocan en un canal, como en la electroforesis, sino que se añaden individualmente a cada carril de migración. La presencia de una inmunoglobulina monoclonal da lugar a la aparición de una banda estrecha tras la tinción de precipitados complejos. Por ejemplo, en el caso de una IgG lambda, habrá una banda estrecha, tanto en el carril en el que se ha depositado el anti-G como en el que se ha depositado el anti-lambda.
Es algo más sensible. La inmunofijación puede revelar una inmunoglobulina no detectada en la electroforesis de proteínas, especialmente en concentraciones bajas (menos de 1 gramo/litro).
Se puede automatizar parcialmente y se puede utilizar en más laboratorios;
Es más fácil de leer e interpretar.
Desméritos
Sin embargo, la inmunofijación sólo es sensible a las inmunoglobulinas y es más cara que la electroforesis de proteínas.
^ Miller, Linda E. (2021). "18. Enfermedades inmunoproliferativas: papel del laboratorio en la evaluación de enfermedades inmunoproliferativas". En Miller, Linda E.; Stevens, Christine Dorresteyn (eds.). Inmunología clínica y serología: una perspectiva de laboratorio (5.ª ed.). Filadelfia: FA Davis. págs. 358–360. ISBN 978-0-8036-9440-8.
