stringtranslate.com

In vitro

Plantas clonadas in vitro

Los estudios in vitro (que significa en vidrio o en el vidrio )se realizan con microorganismos , células o moléculas biológicas fuera de su contexto biológico normal. Coloquialmente llamados " experimentos de tubo de ensayo ", estos estudios en biología y sus subdisciplinas se realizan tradicionalmente en material de laboratorio como tubos de ensayo, matraces, placas de Petri y placas de microtitulación . Los estudios realizados utilizando componentes de un organismo que han sido aislados de su entorno biológico habitual permiten un análisis más detallado o más conveniente que el que se puede hacer con organismos completos; sin embargo, los resultados obtenidos a partir de experimentos in vitro pueden no predecir de manera completa o precisa los efectos en un organismo completo. A diferencia de los experimentos in vitro , los estudios in vivo son aquellos que se realizan en organismos vivos, incluidos los humanos, conocidos como ensayos clínicos, y plantas completas. [1] [2]

Definición

Los estudios in vitro ( del latín "en vidrio"; a menudo no se escriben en cursiva en el uso inglés [3] [4] [5] ) se realizan utilizando componentes de un organismo que han sido aislados de su entorno biológico habitual, como microorganismos, células o moléculas biológicas. Por ejemplo, los microorganismos o las células se pueden estudiar en medios de cultivo artificiales y las proteínas se pueden examinar en soluciones . Estos estudios en biología, medicina y sus subdisciplinas, llamados coloquialmente "experimentos de probeta", se realizan tradicionalmente en tubos de ensayo, matraces, placas de Petri, etc. [6] [7] Ahora involucran la gama completa de técnicas utilizadas en biología molecular, como la ómica . [8]

Por el contrario, los estudios realizados en seres vivos (microorganismos, animales, humanos o plantas enteras) se denominan in vivo . [9]

Ejemplos

Ejemplos de estudios in vitro incluyen: el aislamiento, crecimiento e identificación de células derivadas de organismos multicelulares (en cultivos celulares o tisulares ); componentes subcelulares (por ejemplo, mitocondrias o ribosomas ); extractos celulares o subcelulares (por ejemplo, extractos de germen de trigo o reticulocitos ); moléculas purificadas (como proteínas , ADN o ARN ); y la producción comercial de antibióticos y otros productos farmacéuticos. [10] [11] [12] [13] Los virus, que solo se replican en células vivas, se estudian en el laboratorio en cultivos celulares o tisulares, y muchos virólogos animales se refieren a dicho trabajo como in vitro para distinguirlo del trabajo in vivo en animales completos. [14] [15]

Ventajas

Los estudios in vitro permiten un análisis específico de la especie, más sencillo, más cómodo y más detallado que el que se puede realizar con el organismo completo. Así como los estudios en animales completos sustituyen cada vez más a los ensayos en humanos, los estudios in vitro están sustituyendo a los estudios en animales completos.

Sencillez

Los organismos vivos son sistemas funcionales extremadamente complejos que se componen, como mínimo, de muchas decenas de miles de genes, moléculas de proteínas, moléculas de ARN, pequeños compuestos orgánicos, iones inorgánicos y complejos en un entorno que está organizado espacialmente por membranas y, en el caso de los organismos multicelulares, sistemas de órganos. [23] [24] Estos innumerables componentes interactúan entre sí y con su entorno de una manera que procesa los alimentos, elimina los desechos, mueve los componentes a la ubicación correcta y responde a las moléculas de señalización, otros organismos, la luz, el sonido, el calor, el gusto, el tacto y el equilibrio.

Vista superior de un módulo de exposición de mamíferos Vitrocell "robot fumador", (tapa quitada) vista de cuatro pocillos separados para insertos de cultivo celular que se expondrán al humo del tabaco o un aerosol para un estudio in vitro de los efectos

Esta complejidad dificulta la identificación de las interacciones entre los componentes individuales y la exploración de sus funciones biológicas básicas. El trabajo in vitro simplifica el sistema en estudio, de modo que el investigador puede centrarse en un número reducido de componentes. [25] [26]

Por ejemplo, la identidad de las proteínas del sistema inmunológico (por ejemplo, los anticuerpos) y el mecanismo por el cual reconocen y se unen a antígenos extraños seguirían siendo muy oscuros si no fuera por el uso extensivo del trabajo in vitro para aislar las proteínas, identificar las células y los genes que las producen, estudiar las propiedades físicas de su interacción con los antígenos e identificar cómo esas interacciones conducen a señales celulares que activan otros componentes del sistema inmunológico.

Especificidad de la especie

Otra ventaja de los métodos in vitro es que se pueden estudiar las células humanas sin “extrapolación” de la respuesta celular de un animal experimental. [27] [28] [29]

Conveniencia, automatización

Los métodos in vitro se pueden miniaturizar y automatizar, lo que produce métodos de detección de alto rendimiento para probar moléculas en farmacología o toxicología. [30]

Desventajas

La principal desventaja de los estudios experimentales in vitro es que puede resultar difícil extrapolar los resultados del trabajo in vitro a la biología del organismo intacto. Los investigadores que realizan trabajos in vitro deben tener cuidado de no sobreinterpretar sus resultados, lo que puede llevar a conclusiones erróneas sobre la biología de los organismos y de los sistemas. [31] [32]

Por ejemplo, los científicos que desarrollan un nuevo fármaco viral para tratar una infección con un virus patógeno (por ejemplo, el VIH-1) pueden descubrir que un fármaco candidato funciona para prevenir la replicación viral en un entorno in vitro (normalmente un cultivo celular). Sin embargo, antes de que este fármaco se utilice en la clínica, debe pasar por una serie de ensayos in vivo para determinar si es seguro y eficaz en organismos intactos (normalmente animales pequeños, primates y seres humanos, uno tras otro). Normalmente, la mayoría de los fármacos candidatos que son eficaces in vitro resultan ineficaces in vivo debido a problemas asociados con la administración del fármaco a los tejidos afectados, la toxicidad hacia partes esenciales del organismo que no estaban representadas en los estudios in vitro iniciales u otros problemas. [33]

In vitroBaterías de prueba

Un método que podría ayudar a disminuir la experimentación con animales es el uso de baterías in vitro , en las que se compilan varios ensayos in vitro para cubrir múltiples puntos finales. En el ámbito de la neurotoxicidad del desarrollo y la toxicidad reproductiva, se espera que las baterías de pruebas se conviertan en métodos de detección sencillos para priorizar qué sustancias químicas se deben evaluar en función de su riesgo y en qué orden. [34] [35] [36] [37] En el ámbito de la ecotoxicología, ya se utilizan baterías de pruebas in vitro con fines reglamentarios y para la evaluación toxicológica de sustancias químicas. [38] Las pruebas in vitro también se pueden combinar con pruebas in vivo para crear una batería de pruebas in vitro in vivo , por ejemplo, para pruebas farmacéuticas. [39]

In vitroaen vivoextrapolación

Los resultados obtenidos a partir de experimentos in vitro no suelen poder extrapolarse tal cual para predecir la reacción de un organismo entero in vivo . Por lo tanto, es sumamente importante crear un procedimiento de extrapolación consistente y confiable de los resultados in vitro a los in vivo . Las soluciones incluyen:

Estos dos enfoques no son incompatibles; los mejores sistemas in vitro proporcionan mejores datos para los modelos matemáticos. Sin embargo, los experimentos in vitro cada vez más sofisticados recopilan datos cada vez más numerosos, complejos y difíciles de integrar. En este sentido, son muy necesarios los modelos matemáticos, como los modelos de biología de sistemas . [42]

Extrapolación en farmacología

En farmacología, la IVIVE se puede utilizar para aproximar la farmacocinética (PK) o la farmacodinámica (PD). [ cita requerida ] Dado que el momento y la intensidad de los efectos en un objetivo determinado dependen de la evolución temporal de la concentración del fármaco candidato (molécula original o metabolitos) en ese sitio objetivo, las sensibilidades de los tejidos y órganos in vivo pueden ser completamente diferentes o incluso inversas a las observadas en células cultivadas y expuestas in vitro . Eso indica que la extrapolación de los efectos observados in vitro necesita un modelo cuantitativo de PK in vivo . Los modelos de PK basados ​​en la fisiología ( PBPK ) se aceptan generalmente como fundamentales para las extrapolaciones. [43]

En el caso de efectos tempranos o sin comunicación intercelular, se supone que la misma concentración de exposición celular causa los mismos efectos, tanto cualitativos como cuantitativos, in vitro e in vivo . En estas condiciones, no es suficiente desarrollar un modelo de PD simple de la relación dosis-respuesta observada in vitro y transponerlo sin cambios para predecir los efectos in vivo . [44]

Véase también

Referencias

  1. ^ "Métodos in vitro - ECHA". echa.europa.eu . Consultado el 11 de abril de 2023 .
  2. ^ Toxicidad, Subcomité sobre reproducción y desarrollo del Consejo Nacional de Investigación (EE. UU.) (2001). Diseños de estudios in vitro y con animales experimentales. National Academies Press (EE. UU.).
  3. ^ Merriam-Webster , Merriam-Webster's Collegiate Dictionary, Merriam-Webster, archivado desde el original el 2020-10-10 , consultado el 2014-04-20 .
  4. ^ Iverson, Cheryl; et al., eds. (2007). "12.1.1 Uso de cursiva". Manual de estilo de la AMA (10.ª ed.). Oxford, Oxfordshire: Oxford University Press . ISBN 978-0-19-517633-9.
  5. ^ Asociación Estadounidense de Psicología (2010), "4.21 Uso de cursiva", Manual de publicación de la Asociación Estadounidense de Psicología (6.ª ed.), Washington, DC, EE. UU.: APA, ISBN 978-1-4338-0562-2.
  6. ^ "Métodos in vitro - ECHA". echa.europa.eu . Consultado el 11 de abril de 2023 .
  7. ^ Toxicidad, Subcomité sobre reproducción y desarrollo del Consejo Nacional de Investigación (EE. UU.) (2001). Diseños de estudios in vitro y con animales experimentales. National Academies Press (EE. UU.).
  8. ^ "Tecnologías ómicas en ensayos químicos - OCDE" www.oecd.org . Consultado el 11 de abril de 2023 .
  9. ^ Toxicidad, Subcomité sobre reproducción y desarrollo del Consejo Nacional de Investigación (EE. UU.) (2001). Diseños de estudios in vitro y con animales experimentales. National Academies Press (EE. UU.).
  10. ^ Spielmann, Horst; Goldberg, Alan M. (1 de enero de 1999), Marquardt, Hans; Schäfer, Siegfried G.; McClellan, Roger; Welsch, Frank (eds.), "Capítulo 49 - Métodos in vitro", Toxicology , San Diego: Academic Press, págs. 1131–1138, doi :10.1016/b978-012473270-4/50108-5, ISBN 978-0-12-473270-4, consultado el 11 de abril de 2023
  11. ^ Connolly, Niamh MC; Theurey, Pierre; Adam-Vizi, Vera; Bazán, Nicolás G.; Bernardi, Paolo; Bolaños, Juan P.; Culmsee, Carsten; Dawson, Valina L.; Deshmukh, Mohanish; Duchen, Michael R.; Düssmann, Heiko; Fiskum, Gary; Galindo, María F.; Hardingham, Giles E.; Hardwick, J. Marie (marzo de 2018). "Directrices sobre métodos experimentales para evaluar la disfunción mitocondrial en modelos celulares de enfermedades neurodegenerativas". Muerte celular y diferenciación . 25 (3): 542–572. doi :10.1038/s41418-017-0020-4. ISSN  1476-5403. PMC 5864235 . PMID  29229998. 
  12. ^ Hammerling, Michael J.; Fritz, Brian R.; Yoesep, Danielle J.; Kim, Do Soon; Carlson, Erik D.; Jewett, Michael C. (28 de febrero de 2020). "Síntesis y evolución de ribosomas in vitro a través de la visualización de ribosomas". Nature Communications . 11 (1): 1108. Bibcode :2020NatCo..11.1108H. doi :10.1038/s41467-020-14705-2. ISSN  2041-1723. PMC 7048773 . PMID  32111839. 
  13. ^ Bocanegra, Rebeca; Ismael Plaza, GA; Pulido, Carlos R.; Ibarra, Borja (1 de enero de 2021). "Maquinaria de replicación del ADN: perspectivas a partir de enfoques de moléculas individuales in vitro". Revista de biotecnología estructural y computacional . 19 : 2057–2069. doi :10.1016/j.csbj.2021.04.013. ISSN  2001-0370. PMC 8085672 . PMID  33995902. 
  14. ^ Bruchhagen, Christin; van Krüchten, André; Klemm, Carolina; Luis, Esteban; Ehrhardt, Christina (2018), Yamauchi, Yohei (ed.), "Modelos in vitro para estudiar la superinfección por el virus de la influenza y Staphylococcus aureus a nivel molecular", Virus de la influenza: métodos y protocolos , vol. 1836, Nueva York, NY: Springer, págs. 375–386, doi :10.1007/978-1-4939-8678-1_18, ISBN 978-1-4939-8678-1, PMID  30151583 , consultado el 11 de abril de 2023
  15. ^ Xie, Xuping; Lokugamage, Kumari G.; Zhang, Xianwen; Vu, Michelle N.; Muruato, Antonio E.; Menachery, Vineet D.; Shi, Pei-Yong (marzo de 2021). "Ingeniería del SARS-CoV-2 mediante un sistema genético inverso". Nature Protocols . 16 (3): 1761–1784. doi :10.1038/s41596-021-00491-8. ISSN  1750-2799. PMC 8168523 . PMID  33514944. 
  16. ^ "Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) (artículo)". Khan Academy . Consultado el 11 de abril de 2023 .
  17. ^ Labrou, Nikolaos E. (2014), Labrou, Nikolaos E. (ed.), "Purificación de proteínas: una descripción general", Procesamiento de proteínas aguas abajo: diseño, desarrollo y aplicación de métodos de alta y baja resolución , Métodos en biología molecular, vol. 1129, Totowa, NJ: Humana Press, págs. 3-10, doi :10.1007/978-1-62703-977-2_1, ISBN 978-1-62703-977-2, PMID  24648062 , consultado el 11 de abril de 2023
  18. ^ Johnson, MH (1 de enero de 2013), "Fertilización in vitro", en Maloy, Stanley; Hughes, Kelly (eds.), Brenner's Encyclopedia of Genetics (segunda edición) , San Diego: Academic Press, págs. 44-45, doi :10.1016/b978-0-12-374984-0.00777-4, ISBN 978-0-08-096156-9, consultado el 11 de abril de 2023
  19. ^ "Diagnóstico in vitro - Global". www.who.int . Consultado el 11 de abril de 2023 .
  20. ^ Artursson P.; Palm K.; Luthman K. (2001). "Monocapas de Caco-2 en predicciones experimentales y teóricas del transporte de fármacos". Advanced Drug Delivery Reviews . 46 (1–3): 27–43. doi :10.1016/s0169-409x(00)00128-9. PMID  11259831.
  21. ^ Gargas ML; Burgess RL; Voisard DE; Cason GH; Andersen ME (1989). "Coeficientes de partición de sustancias químicas volátiles de bajo peso molecular en diversos líquidos y tejidos". Toxicología y farmacología aplicada . 98 (1): 87–99. doi :10.1016/0041-008x(89)90137-3. PMID  2929023. S2CID  6928235.
  22. ^ Pelkonen O.; Turpeinen M. (2007). "Extrapolación in vitro-in vivo del aclaramiento hepático: herramientas biológicas, factores de escala, supuestos del modelo y concentraciones correctas". Xenobiotica . 37 (10–11): 1066–1089. doi :10.1080/00498250701620726. PMID  17968737. S2CID  3043750.
  23. ^ Alberts, Bruce (2008). Biología molecular de la célula . Nueva York: Garland Science. ISBN 978-0-8153-4105-5.
  24. ^ "Complejidad biológica y niveles integradores de organización | Aprenda ciencias en Scitable". www.nature.com . Consultado el 11 de abril de 2023 .
  25. ^ Vignais, Paulette M.; Pierre Vignais (2010). Descubrir la vida, fabricar la vida: cómo el método experimental moldeó las ciencias de la vida . Berlín: Springer. ISBN 978-90-481-3766-4.
  26. ^ Jacqueline Nairn; Price, Nicholas C. (2009). Exploración de proteínas: guía para estudiantes sobre métodos y habilidades experimentales . Oxford [Oxfordshire]: Oxford University Press. ISBN 978-0-19-920570-7.
  27. ^ "Alternativas existentes sin uso de animales". AltTox.org. 20 de noviembre de 2016. Archivado desde el original el 13 de marzo de 2020.
  28. ^ Pound, Pandora; Ritskes-Hoitinga, Merel (7 de noviembre de 2018). "¿Es posible superar los problemas de validez externa en la investigación preclínica con animales? Por qué la mayoría de los modelos animales están destinados a fallar". Journal of Translational Medicine . 16 (1): 304. doi : 10.1186/s12967-018-1678-1 . ISSN  1479-5876. PMC 6223056 . PMID  30404629. 
  29. ^ Zeiss, Caroline J. (diciembre de 2021). "Hitos comparativos en el desarrollo del sistema nervioso central posnatal en roedores y humanos". Patología toxicológica . 49 (8): 1368–1373. doi :10.1177/01926233211046933. ISSN  0192-6233. PMID  34569375. S2CID  237944066.
  30. ^ Quignot N.; Hamon J.; Bois F. (2014). Extrapolación de resultados in vitro para predecir la toxicidad humana, en In Vitro Toxicology Systems, Bal-Price A., Jennings P., Eds, serie Métodos en farmacología y toxicología . Nueva York, EE. UU.: Springer Science. págs. 531–550.
  31. ^ Rothman, SS (2002). Lecciones de la célula viva: la cultura de la ciencia y los límites del reduccionismo. Nueva York: McGraw-Hill. ISBN 0-07-137820-0.
  32. ^ Spielmann, Horst; Goldberg, Alan M. (1 de enero de 1999), Marquardt, Hans; Schäfer, Siegfried G.; McClellan, Roger; Welsch, Frank (eds.), "Capítulo 49 - Métodos in vitro", Toxicology , San Diego: Academic Press, págs. 1131–1138, doi :10.1016/b978-012473270-4/50108-5, ISBN 978-0-12-473270-4, consultado el 11 de abril de 2023
  33. ^ De Clercq E (octubre de 2005). "Aspectos destacados recientes en el desarrollo de nuevos fármacos antivirales". Curr. Opin. Microbiol . 8 (5): 552–60. doi :10.1016/j.mib.2005.08.010. PMC 7108330. PMID 16125443  . 
  34. ^ Blum, Jonathan; Masjosthusmann, Stefan; Bartmann, Cristina; Bendt, Farina; Dolde, Xenia; Dönmez, Arif; Forster, Nils; Holzer, Anna-Katharina; Hubenthal, Ulrike; Keßel, Hagen Eike; Kilic, Sadiye; Klose, Jördis; Pahl, Melanie; Stürzl, Lynn-Christin; Mangas, Iris (01/01/2023). "Establecimiento de una batería in vitro basada en células humanas para evaluar el peligro de neurotoxicidad de las sustancias químicas para el desarrollo". Quimiosfera . 311 (Parte 2): 137035. Bibcode : 2023Chmsp.311m7035B. doi : 10.1016/j.chemosphere.2022.137035 . Revista de Biología Molecular y  Genética  .
  35. ^ OCDE (14 de abril de 2023). «Trabajo de la OCDE sobre ensayos in vitro para la neurotoxicidad del desarrollo» . Consultado el 4 de julio de 2023 .
  36. ^ Piersma, AH; Bosgra, S.; van Duursen, MBM; Hermsen, SAB; Jonker, LRA; Kroese, ED; van der Linden, Carolina del Sur; Hombre, H.; Roelofs, MJE; Schulpen, SHW; Schwarz, M.; Uibel, F.; van Vugt-Lussenburg, BMA; Westerhout, J.; Wolterbeek, APM (1 de julio de 2013). "Evaluación de una batería de pruebas in vitro alternativa para la detección de tóxicos para la reproducción". Toxicología Reproductiva . 38 : 53–64. doi :10.1016/j.reprotox.2013.03.002. ISSN  0890-6238. PMID  23511061.
  37. ^ Martin, Melissa M.; Baker, Nancy C.; Boyes, William K.; Carstens, Kelly E.; Culbreth, Megan E.; Gilbert, Mary E.; Harrill, Joshua A.; Nyffeler, Johanna; Padilla, Stephanie; Friedman, Katie Paul; Shafer, Timothy J. (1 de septiembre de 2022). "Una revisión de la literatura impulsada por expertos sobre sustancias químicas "negativas" para la evaluación del ensayo in vitro de neurotoxicidad del desarrollo (DNT)". Neurotoxicología y teratología . 93 : 107117. doi :10.1016/j.ntt.2022.107117. ISSN  0892-0362. OSTI  1981723. PMID  35908584. S2CID  251187782.
  38. ^ Repetto, Guillermo (2013), "Baterías de prueba en ecotoxicología", en Férard, Jean-François; Blaise, Christian (eds.), Enciclopedia de ecotoxicología acuática , Dordrecht: Springer Netherlands, págs. 1105–1128, doi :10.1007/978-94-007-5704-2_100, ISBN 978-94-007-5704-2, consultado el 4 de julio de 2023
  39. ^ Agencia Europea de Medicamentos (EMA) (11 de febrero de 2013). "ICH S2 (R1) Genotoxicity testing and data interpreting for pharmaceuticals intended for human use - Scientific guideline" (PDF) . Agencia Europea de Medicamentos - Ciencia Medicamentos Salud .
  40. ^ Sung, JH; Esch, MB; Shuler, ML (2010). "Integración de plataformas in silico e in vitro para modelado farmacocinético-farmacodinámico". Opinión de expertos sobre metabolismo y toxicología de fármacos . 6 (9): 1063–1081. doi :10.1517/17425255.2010.496251. PMID  20540627. S2CID  30583735.
  41. ^ Quignot, Nadia; Bois, Frédéric Yves (2013). "Un modelo computacional para predecir la secreción de esteroides ováricos en ratas a partir de experimentos in vitro con disruptores endocrinos". PLOS ONE . ​​8 (1): e53891. Bibcode :2013PLoSO...853891Q. doi : 10.1371/journal.pone.0053891 . PMC 3543310 . PMID  23326527. 
  42. ^ Proença, Susana; Escher, Beate I.; Fischer, Fabian C.; Fisher, Ciarán; Grégoire, Sébastien; Hewitt, Nicky J.; Nicol, Beate; Paini, Alicia; Kramer, Nynke I. (1 de junio de 2021). "Exposición efectiva a sustancias químicas en sistemas celulares in vitro: una revisión de los modelos de distribución química". Toxicología in Vitro . 73 : 105133. doi : 10.1016/j.tiv.2021.105133 . ISSN  0887-2333. PMID  33662518. S2CID  232122825.
  43. ^ Yoon M, Campbell JL, Andersen ME, Clewell HJ (2012). "Extrapolación cuantitativa in vitro a in vivo de los resultados de ensayos de toxicidad basados ​​en células". Critical Reviews in Toxicology . 42 (8): 633–652. doi :10.3109/10408444.2012.692115. PMID  22667820. S2CID  3083574.
  44. ^ Louisse J, de Jong E, van de Sandt JJ, Blaauboer BJ, Woutersen RA, Piersma AH, Rietjens IM, Verwei M (2010). "El uso de datos de toxicidad in vitro y modelos cinéticos basados ​​en la fisiología para predecir curvas dosis-respuesta para la toxicidad del desarrollo in vivo de los éteres de glicol en ratas y humanos". Toxicological Sciences . 118 (2): 470–484. doi : 10.1093/toxsci/kfq270 . PMID  20833708.

Enlaces externos