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Ensayo de impronta de dedos del pie

El ensayo de huella de ADN , también conocido como ensayo de inhibición de la extensión del cebador , [1] es un método utilizado en biología molecular que permite examinar las interacciones entre el ARN mensajero y los ribosomas o las proteínas de unión al ARN . [2] Es diferente del ensayo de huella de ADN más comúnmente utilizado . El ensayo de huella de ADN se ha utilizado para examinar la formación del complejo de iniciación de la traducción. [3]

Para realizar un ensayo de huella digital, se necesita el ARNm de interés, ribosomas, un cebador de ADN, nucleótidos libres y transcriptasa inversa (RT), entre otros reactivos . [4] El ensayo implica dejar que la RT genere ADNc hasta que sea bloqueado por cualquier ribosoma unido, lo que da como resultado fragmentos más cortos llamados huellas digitales cuando se observan los resultados en un gel de secuenciación .

Referencias

  1. ^ Hartz, D.; McPheeters, DS; Traut, R.; Gold, L. (1 de enero de 1988). "Análisis de inhibición de la extensión de complejos de iniciación de la traducción". Ribosomas . Métodos en enzimología. Vol. 164. págs. 419–425. doi :10.1016/s0076-6879(88)64058-4. ISBN 978-0-12-182065-7. ISSN  0076-6879. PMID  2468068.
  2. ^ Shirokikh, Nikolay E.; Alkalaeva, Elena Z.; Vassilenko, Konstantin S.; Afonina, Zhanna A.; Alekhina, Olga M.; Kisselev, Lev L.; Spirin, Alexander S. (1 de enero de 2010). "Análisis cuantitativo de complejos ribosoma-ARNm en diferentes etapas de traducción". Investigación de ácidos nucleicos . 38 (3): e15. doi :10.1093/nar/gkp1025. ISSN  0305-1048. PMC 2817456 . PMID  19910372. 
  3. ^ Chang, JT; Green, CB; Wolf, RE (1995-11-01). "Inhibición de la iniciación de la traducción en el ARNm de Escherichia coli gnd mediante la formación de una estructura secundaria de largo alcance que involucra el sitio de unión del ribosoma y la secuencia complementaria interna". Journal of Bacteriology . 177 (22): 6560–6567. doi :10.1128/jb.177.22.6560-6567.1995. ISSN  0021-9193. PMC 177509 . PMID  7592434. 
  4. ^ Kozak, M (1998-11-01). "Análisis de la extensión de cebadores de complejos eucariotas ribosoma-ARNm". Nucleic Acids Research . 26 (21): 4853–4859. doi :10.1093/nar/26.21.4853. ISSN  0305-1048. PMC 147915 . PMID  9776744. 

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