En biología celular , el fraccionamiento celular es el proceso utilizado para separar los componentes celulares preservando las funciones individuales de cada componente. [1] Este es un método que se utilizó originalmente para demostrar la ubicación celular de varios procesos bioquímicos . Otros usos del fraccionamiento subcelular son proporcionar una fuente enriquecida de una proteína para una mayor purificación y facilitar el diagnóstico de diversos estados patológicos. [2]
El tejido normalmente se homogeneiza en una solución tampón que es isotónica para detener el daño osmótico. Los mecanismos de homogeneización incluyen trituración, picado, picado, cambios de presión, choque osmótico , congelación-descongelación y ultrasonido . Luego, las muestras se mantienen frías para evitar daños enzimáticos. Es la formación de una masa homogénea de células (homogenado celular o suspensión celular ). Implica triturar células en un medio adecuado en presencia de determinadas enzimas con el pH, la composición iónica y la temperatura correctos. Por ejemplo, la pectinasa que digiere la laminilla media entre las células vegetales.
Es posible que este paso no sea necesario dependiendo de la fuente de las células . Sin embargo, es probable que el tejido animal produzca tejido conectivo que debe eliminarse. Comúnmente, la filtración se logra vertiendo a través de una gasa o con un filtro de succión y el filtro cerámico de grado correspondiente.
La purificación se logra mediante centrifugación diferencial : el aumento secuencial de la fuerza gravitacional da como resultado la separación secuencial de orgánulos según su densidad .
Medios para la separación celular por densidad: