Los análogos de aminoácidos fotorreactivos son análogos artificiales de aminoácidos naturales que pueden usarse para la reticulación de complejos proteicos. [1] Los análogos de aminoácidos fotorreactivos se pueden incorporar en proteínas y péptidos in vivo o in vitro . [2] Los análogos de aminoácidos fotorreactivos de uso común son los análogos fotorreactivos de diazirina de leucina y metionina , y para -benzoilfenilalanina. Tras la exposición a la luz ultravioleta , se activan y se unen covalentemente a proteínas que interactúan y que se encuentran a unos pocos angstroms del análogo de aminoácido fotorreactivo.
L -Foto-leucina y L -foto-metionina son análogos de los aminoácidos L - leucina y L - metionina naturalesLuego se activan con luz ultravioleta (UV) para entrecruzar covalentemente proteínas dentro de dominios de interacción proteína-proteína en suentorno nativo in vivo . El método permite la determinación y caracterización de interacciones de proteínas tanto estables como transitorias en las células sin la adición de entrecruzadores químicos y disolventes asociados que puedan afectar negativamente a la biología celular que se estudia en el experimento.
Cuando se utilizan en combinación con medios limitantes que carecen de leucina y metionina, la maquinaria de síntesis de proteínas celulares trata los derivados fotoactivables como aminoácidos naturales . Como resultado, pueden sustituir a la leucina o la metionina en la estructura primaria de las proteínas. Los derivados de fotoleucina y fotometionina contienen anillos de diazirina que se activan cuando se exponen a la luz ultravioleta para convertirse en intermediarios reactivos que forman enlaces covalentes con cadenas laterales y cadenas principales de proteínas cercanas. Las proteínas que interactúan naturalmente dentro de la célula pueden quedar atrapadas instantáneamente mediante la fotoactivación de las proteínas que contienen diazirina en las células cultivadas. Los complejos de proteínas reticuladas se pueden detectar mediante una movilidad reducida en SDS-PAGE seguida de transferencia Western , cromatografía de exclusión por tamaño , sedimentación en gradiente de densidad de sacarosa o espectrometría de masas .