Un espectrofluorómetro es un instrumento que aprovecha las propiedades fluorescentes de algunos compuestos para proporcionar información sobre su concentración y entorno químico en una muestra. Se selecciona una determinada longitud de onda de excitación y se observa la emisión en una única longitud de onda o se realiza un escaneo para registrar la intensidad en función de la longitud de onda, también llamado espectro de emisión. [1] El instrumento se utiliza en espectroscopia de fluorescencia .
Generalmente, los espectrofluorómetros utilizan fuentes de luz de alta intensidad para bombardear una muestra con tantos fotones como sea posible. Esto permite que la cantidad máxima de moléculas se encuentre en un estado excitado en cualquier momento. La luz pasa a través de un filtro, que selecciona una longitud de onda fija, o un monocromador , que permite seleccionar una longitud de onda de interés para usarla como luz excitadora. La emisión se recoge en la perpendicular a la luz emitida. La emisión también pasa a través de un filtro o un monocromador antes de ser detectada por un tubo fotomultiplicador , un fotodiodo o un detector de dispositivo acoplado a carga . La señal se puede procesar como salida digital o analógica.
Los sistemas varían mucho y una serie de consideraciones afectan la elección. La primera es la relación señal/ruido. Hay muchas formas de analizar la relación señal/ruido de un sistema determinado, pero el estándar aceptado es el uso de la señal Raman del agua. La sensibilidad o el límite de detección es otra especificación a tener en cuenta, es decir, la cantidad de luz que se puede medir. El estándar sería la fluoresceína en NaOH ; los valores típicos para un instrumento de alta gama están en el rango femtomolar.
Estos sistemas vienen con muchas opciones, entre ellas: