El reactivo de Ellman (ácido 5,5′-ditiobis-(ácido 2-nitrobenzoico) o DTNB ) es una sustancia química colorógena que se utiliza para cuantificar el número o la concentración de grupos tiol en una muestra. [3] Fue desarrollado por George L. Ellman.
En el artículo original de Ellman, [3] preparó este reactivo oxidando 2-nitro-5-clorobenzaldehído al ácido carboxílico, introduciendo el tiol a través de sulfuro de sodio y acoplando el monómero mediante oxidación con yodo . Hoy en día, este reactivo está disponible comercialmente.
Los tioles reaccionan con este compuesto, escindiendo el enlace disulfuro para dar 2-nitro-5-tiobenzoato (TNB − ), que se ioniza al dianión 2− de TNB en agua a pH neutro y alcalino. Este ion TNB 2− tiene un color amarillo.
Esta reacción es rápida y estequiométrica, con la adición de un mol de tiol se libera un mol de TNB. El TNB 2− se cuantifica en un espectrofotómetro midiendo la absorbancia de la luz visible a 412 nm, utilizando un coeficiente de extinción de 14.150 M −1 cm −1 para soluciones tampón diluidas, [4] [5] y un coeficiente de 13.700 M − 1 cm −1 para altas concentraciones de sal, como clorhidrato de guanidinio 6 M o urea 8 M. [5] La publicación original de Ellman de 1959 estimó la extinción molar en 13.600 M −1 cm −1 , y este valor se puede encontrar en algunas aplicaciones modernas del método a pesar de las determinaciones mejoradas. [6] Es posible que el DTNB comercial no sea completamente puro, por lo que puede requerir recristalización para obtener resultados completamente precisos y reproducibles. [5]
El reactivo de Ellman se puede utilizar para medir tioles de baja masa molecular, como el glutatión, tanto en soluciones puras como en muestras biológicas, como la sangre. [7] También puede medir el número de grupos tiol en las proteínas. [7]