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gradiente de pH inmovilizado

Estructura general de Immobiline. [1]

Dentro de la química para reacciones ácido-base , los geles de gradiente de pH inmovilizado ( IPG ) son la matriz de gel de acrilamida copolimerizada con el gradiente de pH , lo que da como resultado gradientes completamente estables, excepto los valores de pH más alcalinos (>12). El gradiente de pH inmovilizado se obtiene mediante el cambio continuo en la proporción de Immobilines . Un Immobiline es un ácido o base débil definido por su valor pK. [2] Los gradientes de pH inmovilizados (IPG) se elaboran mezclando dos tipos de mezclas de acrilamida, una con Immobiline que tiene propiedades amortiguadoras ácidas y otra con propiedades amortiguadoras básicas. [3] Las concentraciones de los tampones en las dos soluciones definen el rango y la forma del gradiente de pH producido. Ambas soluciones contienen monómeros de acrilamida y catalizadores. Durante la polimerización, la porción de acrilamida de los tampones copolimeriza con los monómeros de acrilamida y bisacrilamida para formar un gel de poliacrilamida. Estos geles polimerizados están respaldados con un soporte de plástico que permite un fácil manejo y mejora el rendimiento del IPG. Luego se lava el gel para eliminar los catalizadores y los monómeros no polimerizados , que interfieren con la separación isoeléctrica. IPG aumentó la reproducibilidad [4] [5] del enfoque isoeléctrico y la electroforesis en gel 2D . Otras ventajas son una mayor resolución, [6] separación reproducible de proteínas alcalinas [7] y una mayor capacidad de carga (hasta 10 mg). [8]

Este método alternativo elimina los problemas de inestabilidad del gradiente y la mala capacidad de carga de la muestra asociados con el gradiente de pH del anfolito portador . [9] Se encuentran disponibles geles IPG prefabricados comerciales.

Referencias

  1. ^ Görg, Angelika; Weiss, Walter; Dunn, Michael J. (1 de diciembre de 2004). "Tecnología actual de electroforesis bidimensional para proteómica". Proteómica . 4 (12): 3665–3685. doi :10.1002/pmic.200401031. ISSN  1615-9853. PMID  15543535.
  2. ^ Barnes et al., Electroforesis en la práctica: una guía para la teoría y la práctica. Página 44. VCH Publishers Inc, 1993 (EE.UU.)
  3. ^ Görg, Angelika; Weiss, Walter; Dunn, Michael J. (1 de diciembre de 2004). "Tecnología actual de electroforesis bidimensional para proteómica". Proteómica . 4 (12): 3665–3685. doi :10.1002/pmic.200401031. ISSN  1615-9853. PMID  15543535.
  4. ^ Corbett, JM; Dunn, MJ; Posch, A.; Görg, A. (1 de septiembre de 1994). "Reproducibilidad posicional de manchas de proteínas en electroforesis en gel de poliacrilamida bidimensional mediante enfoque isoeléctrico de gradiente de pH inmovilizado en la primera dimensión: una comparación entre laboratorios". Electroforesis . 15 (8–9): 1205–1211. doi : 10.1002/elps.11501501182. ISSN  0173-0835. PMID  7532129.
  5. ^ Blomberg, A.; Blomberg, L.; Norbeck, J.; Fey, SJ; Larsen, PM; Larsen, M.; Roepstorff, P.; Degand, H.; Boutry, M. (1 de octubre de 1995). "Reproducibilidad entre laboratorios de patrones de proteínas de levadura analizados mediante electroforesis en gel bidimensional con gradiente de pH inmovilizado". Electroforesis . 16 (10): 1935-1945. doi : 10.1002/elps.11501601320. ISSN  0173-0835. PMID  8586069.
  6. ^ Wildgruber, R.; Más difícil, A.; Obermaier, C.; Boguth, G.; Weiss, W.; Fey, SJ; Larsen, PM; Görg, A. (1 de julio de 2000). "Hacia una mayor resolución: electroforesis bidimensional de proteínas de Saccharomyces cerevisiae utilizando gradientes de pH inmovilizados estrechos superpuestos". Electroforesis . 21 (13): 2610–2616. doi :10.1002/1522-2683(20000701)21:13<2610::AID-ELPS2610>3.0.CO;2-H. ISSN  0173-0835. PMID  10949137.
  7. ^ Wildgruber, Robert; Reil, Geroldo; Dibuja, Oliver; Parlar, Harun; Görg, Angelika (1 de junio de 2002). "Base de datos bidimensional basada en web de proteínas de Saccharomyces cerevisiae utilizando gradientes de pH inmovilizados de pH 6 a pH 12 y espectrometría de masas de tiempo de vuelo de ionización/desorción láser asistida por matriz". Proteómica . 2 (6): 727–732. doi :10.1002/1615-9861(200206)2:6<727::AID-PROT727>3.0.CO;2-2. ISSN  1615-9853. PMID  12112855.
  8. ^ Görg, A.; Postel, W.; Federico, C.; Kuick, R.; Strahler, JR; Hanash, SM (1 de septiembre de 1991). "Variabilidad posicional del punto dependiente de la temperatura en patrones de polipéptidos bidimensionales". Electroforesis . 12 (9): 653–658. doi : 10.1002/elps.1150120910. ISSN  0173-0835. PMID  1752246.
  9. ^ Wilkins et al., Investigación del proteoma: nuevas fronteras en genómica funcional. Página 14. Springer, 1997 (Alemania)