Un microbiólogo realiza una prueba de electroforesis en gel de campo pulsado que se utiliza en la tipificación bacteriana.
La electroforesis en gel de campo pulsado ( PFGE ) es una técnica utilizada para la separación de grandes moléculas de ADN mediante la aplicación de un campo eléctrico que periódicamente cambia de dirección a una matriz de gel . [1] [2] A diferencia de la electroforesis en gel de agarosa estándar , que puede separar fragmentos de ADN de hasta 50 kb, la PFGE resuelve fragmentos de hasta 10 Mb. [1] Esto permite el análisis directo del ADN genómico. [2]
Historia
En 1984, David C. Schwartz y Charles Cantor publicaron la primera aplicación exitosa de campos eléctricos alternos para la separación de grandes moléculas de ADN. [3] [4] Esta técnica, que llamaron PFGE, resultó en el desarrollo de varias variaciones, incluyendo la electroforesis en gel de alternancia de campos ortogonales (OFAGE), la electroforesis en gel de alternancia transversal (TAFE), la electroforesis en gel de inversión de campo (FIGE) y los campos eléctricos homogéneos fijados (CHEF), entre otros. [3]
Procedimiento
Análisis de conglomerados en BioNumerics de las cepas enteroagregativas de Escherichia coli a partir de la huella dactilar mediante electroforesis en gel de campo pulsado
El procedimiento para la electroforesis en gel de agarosa PFGE es similar al de la electroforesis en gel de agarosa estándar , con la principal excepción de la aplicación de la corriente eléctrica. Generalmente, en las cámaras de electroforesis PFGE, el voltaje cambia periódicamente entre tres direcciones: una a lo largo del eje central y dos en un ángulo de 60 grados a lo largo de cada lado. [5] La aplicación del voltaje puede cambiar dependiendo de la variación de PFGE utilizada. [6] [7]
Aplicaciones
La PFGE puede utilizarse para la genotipificación o la identificación genética . Se ha considerado comúnmente un estándar de oro en estudios epidemiológicos de organismos patógenos durante varias décadas. Por ejemplo, la subtipificación de aislamientos bacterianos con este método ha hecho más fácil discriminar entre cepas de Listeria monocytogenes , Lactococcus garvieae [8] y algunos aislamientos clínicos del grupo Bacillus cereus [9] aislados de organismos acuáticos patógenos y, por lo tanto, vincular aislamientos ambientales o alimentarios con infecciones clínicas. Ahora está en proceso de ser reemplazado por métodos de secuenciación de próxima generación. [10]
^ ab Kaufmann, Mary Elizabeth (1998). "Electroforesis en gel de campo pulsado". Bacteriología molecular . Métodos en medicina molecular. Vol. 15. págs. 33–50. doi :10.1385/0-89603-498-4:33. ISBN 0-89603-498-4. Número de identificación personal 21390741.
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