La reacción en cadena de la polimerasa anidada ( PCR anidada ) es una modificación de la reacción en cadena de la polimerasa destinada a reducir la unión no específica en productos debido a la amplificación de sitios de unión de cebadores inesperados. [1]
La reacción en cadena de la polimerasa es el proceso que se utiliza para amplificar muestras de ADN , a través de una ADN polimerasa mediada por la temperatura . Los productos se pueden utilizar para secuenciar o analizar, y este proceso es una parte clave de muchos laboratorios de investigación genética , junto con los usos en la identificación de ADN para la ciencia forense y otros casos genéticos humanos. La PCR convencional requiere cebadores complementarios a los extremos del ADN objetivo. La cantidad de producto de la PCR aumenta con el número de ciclos de temperatura a los que se somete la reacción. Un problema que ocurre con frecuencia es que los cebadores se unen a regiones incorrectas del ADN, lo que da lugar a productos inesperados. Este problema se vuelve más probable con un mayor número de ciclos de PCR.
La reacción en cadena de la polimerasa anidada implica dos conjuntos de cebadores, que se utilizan en dos ejecuciones sucesivas de la reacción en cadena de la polimerasa; el segundo conjunto está destinado a amplificar un objetivo secundario dentro del producto de la primera ejecución. Esto permite la amplificación para una cantidad baja de ejecuciones en la primera ronda, lo que limita los productos no específicos. El segundo conjunto de cebadores anidados solo debe amplificar el producto deseado de la primera ronda de amplificación y no el producto no específico. Esto permite ejecutar más ciclos totales mientras se minimizan los productos no específicos. Esto es útil para plantillas raras o PCR con un alto fondo.
El ADN objetivo se somete a la primera ejecución de la reacción en cadena de la polimerasa con el primer conjunto de cebadores, que se muestra en verde. La selección de sitios de unión de cebadores alternativos y similares da como resultado una selección de productos, de los cuales solo uno contiene la secuencia deseada.
El producto de la primera reacción se somete a una segunda ejecución con el segundo conjunto de cebadores, que se muestra en rojo. Es muy poco probable que alguno de los productos de PCR no deseados contenga sitios de unión para ambos cebadores nuevos, lo que garantiza que el producto de la segunda PCR tenga poca contaminación de productos no deseados.
