El cromatoenfoque es una técnica de separación de proteínas que permite la resolución de proteínas individuales y otros anfolitos de una mezcla compleja según las diferencias en su punto isoeléctrico . [1] El cromatoenfoque utiliza resinas de intercambio iónico y generalmente se realiza en cromatografía líquida de proteínas rápida (FPLC) o equipo similar capaz de producir gradientes de tampón continuos , aunque esto no es un requisito. A diferencia de la cromatografía de intercambio iónico típica , donde las moléculas unidas se eluyen de la resina al aumentar la fuerza iónica del entorno del tampón, el cromatoenfoque eluye las especies unidas al alterar el pH del tampón. Esto cambia la carga superficial neta de las moléculas unidas, alterando su avidez por la resina. A medida que el pH cambiante del sistema tampón atraviesa el pI de una molécula dada, esa molécula se eluirá de la resina, ya que ya no poseerá una carga superficial neta (un requisito para la unión molecular a las resinas de intercambio iónico). La cromatoenfoque es una técnica de purificación potente con respecto a las proteínas, ya que puede resolver especies muy similares que difieren en menos de 0,05 unidades de pH [2] que pueden no separarse bien, o no separarse en absoluto, utilizando estrategias de intercambio iónico tradicionales. Una desventaja importante de esta técnica es que algunas proteínas se agregarán cuando estén presentes en concentraciones relativamente altas y no tengan carga superficial neta. Esto puede causar el bloqueo de la resina, lo que es muy problemático cuando se utilizan columnas selladas de resina de intercambio iónico en equipos FPLC, lo que da como resultado la acumulación de presión y la posible falla del equipo. Los problemas de agregación aparente a veces se pueden superar limitando la concentración de la muestra y el uso de aditivos tampón que impidan la formación de agregados. [3]