Trampa genética

La captura de genes es un método de alto rendimiento que se utiliza para introducir mutaciones insercionales en el genoma de un organismo.

Método

El atrapamiento se realiza con vectores de captura de genes cuyo elemento principal es un casete de atrapamiento de genes que consiste en un gen reportero sin promotor y/o un marcador genético seleccionable , flanqueado por un sitio de empalme 3' aguas arriba (aceptor de empalme; SA) y una secuencia de terminación transcripcional aguas abajo (secuencia de poliadenilación ; poliA).

Cuando se inserta en un intrón de un gen expresado, el casete de trampa génica se transcribe a partir del promotor endógeno de ese gen en forma de una transcripción de fusión en la que el o los exones aguas arriba del sitio de inserción se empalman en el marco del gen marcador/reportero seleccionable. Dado que la transcripción se termina prematuramente en el sitio de poliadenilación insertado, la transcripción de fusión procesada codifica una versión truncada y no funcional de la proteína celular y del gen marcador/reportero seleccionable. Por lo tanto, las trampas génicas inactivan y notifican simultáneamente la expresión del gen atrapado en el sitio de inserción, y proporcionan una etiqueta de ADN (etiqueta de secuencia de trampa génica, GTST) para la rápida identificación del gen alterado . ^{[1] [2]}

Acceso

El Consorcio Internacional de Trampas Genéticas está centralizando los datos y suministrando líneas celulares modificadas. ^[3]

Referencias

1. Cobellis, G; Nicolaus, G; et al. (2005). "Etiquetado de genes con sitios de intercambio de casetes". Nucleic Acids Res . 33 (4): e44. doi :10.1093/nar/gni045. PMC  552971 . PMID  15741177.
2. De-Zolt, S; Schnutgen, F; et al. (2006). "Captura de alto rendimiento de genes de la vía secretora en células madre embrionarias de ratón". Nucleic Acids Res . 34 (3): 25. doi :10.1093/nar/gnj026. PMC 1369290 . PMID  16478711. 
3. "IGTC, Consorcio Internacional de Trampas Genéticas". www.genetrap.org . Consultado el 11 de febrero de 2018 .

Lectura adicional

• Gossler A, Joyner AL, Rossant J, Skarnes WC (abril de 1989). "Células madre embrionarias de ratón y construcciones de reporteros para detectar genes regulados por el desarrollo". Science . 244 (4903): 463–5. doi :10.1126/science.2497519. PMID  2497519.
• von Melchner H, Ruley HE (agosto de 1989). "Identificación de promotores celulares mediante el uso de una trampa de promotores de retrovirus". Journal of Virology . 63 (8): 3227–33. doi :10.1128/JVI.63.8.3227-3233.1989. PMC  250892 . PMID  2545900.
• Friedrich G, Soriano P (septiembre de 1991). "Trampas promotoras en células madre embrionarias: un análisis genético para identificar y mutar genes de desarrollo en ratones". Genes & Development . 5 (9): 1513–23. doi : 10.1101/gad.5.9.1513 . PMID  1653172.
• Zambrowicz BP, Friedrich GA, Buxton EC, Lilleberg SL, Person C, Sands AT (abril de 1998). "Alteración e identificación de secuencias de 2000 genes en células madre embrionarias de ratón". Nature . 392 (6676): 608–11. doi :10.1038/33423. PMID  9560157. S2CID  4329895.
• Wiles MV, Vauti F, Otte J, Füchtbauer EM, Ruiz P, Füchtbauer A, Arnold HH, Lehrach H, Metz T, von Melchner H, Wurst W (enero de 2000). "Establecimiento de una biblioteca de etiquetas de secuencias de trampas genéticas para generar ratones mutantes a partir de células madre embrionarias". Nature Genetics . 24 (1): 13–4. doi :10.1038/71622. PMID  10615117. S2CID  29505338.
• Stanford WL, Cohn JB, Cordes SP (octubre de 2001). "Mutagénesis con trampas genéticas: pasado, presente y más allá". Nature Reviews Genetics . 2 (10): 756–68. doi :10.1038/35093548. PMID  11584292. S2CID  11468334.
• Skarnes WC, von Melchner H, Wurst W, Hicks G, Nord AS, Cox T, Young SG, Ruiz P, Soriano P, Tessier-Lavigne M, Conklin BR, Stanford WL, Rossant J (junio de 2004). "Un recurso público de trampas genéticas para la genómica funcional del ratón". Nature Genetics . 36 (6): 543–4. doi :10.1038/ng0604-543. PMC  2716026 . PMID  15167922.
• Hansen J, Floss T, Van Sloun P, Füchtbauer EM, Vauti F, Arnold HH, Schnütgen F, Wurst W, von Melchner H, Ruiz P (agosto de 2003). "Un enfoque de mutagénesis a gran escala impulsada por genes para el análisis funcional del genoma del ratón". Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 100 (17): 9918–22. doi : 10.1073/pnas.1633296100 . PMC  187885 . PMID  12904583.
• Zambrowicz BP, Abuin A, Ramirez-Solis R, Richter LJ, Piggott J, BeltrandelRio H, et al. (noviembre de 2003). "La deficiencia de la quinasa Wnk1 reduce la presión arterial en ratones: una prueba de detección de genes para identificar objetivos potenciales para la intervención terapéutica". Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 100 (24): 14109–14. doi : 10.1073/pnas.2336103100 . PMC  283554 . PMID  14610273.
• Schnütgen F, De-Zolt S, Van Sloun P, Hollatz M, Floss T, Hansen J, Altschmied J, Seisenberger C, Ghyselinck NB, Ruiz P, Chambon P, Wurst W, von Melchner H (mayo de 2005). "Producción de alelos multipropósito en todo el genoma para el análisis funcional del genoma del ratón". Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 102 (20): 7221–6. doi : 10.1073/pnas.0502273102 . PMC  1129123 . PMID  15870191.
• Springer PS (julio de 2000). "Trampas genéticas: herramientas para el desarrollo y la genómica de las plantas". The Plant Cell . 12 (7): 1007–20. doi :10.2307/3871251. JSTOR  3871251. PMC  149045 . PMID  10899970.

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